为扩大可耕地面积，增加粮食产量，沿海滩涂盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐碱基因培育出了耐盐碱水稻新品系。请据图回答下列问题：
表 几种限制酶识别序列及切割位点表
| 限制酶 | Alu I | EcoR I | Pat I | Sma I |
| 切割位点 |
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启动子和终止子
启动子和终止子
的，如果要将耐盐碱基因和质粒重组，应该在基因两侧的A和 B位置除了接上以上两个结构外还需分别加入 EcoRⅠ和SmaI
EcoRⅠ和SmaI
限制酶识别序列，这样设计的优点是 避免质粒和目的基因自身环化以及反向连接
避免质粒和目的基因自身环化以及反向连接
。（2）过程②采用PCR技术扩增目的基因时，在PCR反应体系的主要成分中应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板DNA、TaqDNA 聚合酶和引物Ⅰ和引物Ⅱ，若在该反应体系中，目的基因
扩增了4代，则共用了引物Ⅰ
15
15
个。（3）PCR反应中温度呈现周期性变化，其中加热到90～95℃是
变性
变性
过程，然后冷却到55-60℃使引物 与互补DNA链结合，继续加热到70～75℃，目的是 四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶作用下进行延伸（耐高温的DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成）
四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶作用下进行延伸（耐高温的DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成）
。（4）在步骤⑤⑥过程中都需用
Ca2+
Ca2+
处理两类细菌。为了确认目的基因通过⑦过程导入植物细胞中 后是否成功表达目的蛋白质，通常从分子水平进行检测的方法是用 抗原—抗体杂交
抗原—抗体杂交
法。（5）艾弗里等人的肺炎双球菌转化实验也可以说是基因工程的先导，如果说他们的工作为基因工程理论的建立提供了启示，那么，这一启示是
DNA可以从一个生物体转移到另一个生物体
DNA可以从一个生物体转移到另一个生物体
。【考点】基因工程的操作过程综合；DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】启动子和终止子；EcoRⅠ和SmaI；避免质粒和目的基因自身环化以及反向连接；15；变性；四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶作用下进行延伸（耐高温的DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成）；Ca2+；抗原—抗体杂交；DNA可以从一个生物体转移到另一个生物体
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：7引用：1难度：0.6
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发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
