棉铃虫和蚜虫是常见的植物害虫，Cry1A基因的表达产物对棉铃虫等鳞翅目昆虫有较强的毒性，GNA基因的表达产物对蚜虫等刺吸式口器的昆虫有较强的毒性。科研人员将Cry1A基因与GNA基因连接在一起，构建了双抗虫基因的重组表达载体，并转入烟草细胞，获得了具有双抗性的转基因烟草，其部分过程如图1所示，请分析并回答以下问题：
注：Klenow能将黏性末端转变为平末端；图中不同限制酶切出的黏性末端均不同。
（1）过程③将Cry1A基因与GNA基因相连，可选用 T4DNA连接酶T4DNA连接酶（“E•coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
（2）过程④应该选用 EcoRⅠ和HindⅢEcoRⅠ和HindⅢ（填图中限制酶）切割植物表达载体，以便和目的基因相连，形成重组表达载体。
（3）将重组表达载体转入农杆菌之前，一般先用 Ca2+Ca2+处理农杆菌，使其成为感受态细胞。
（4）让农杆菌侵染烟草叶片前，需要通过实验筛选农杆菌：将培养农杆菌的培养基倒平板后均分为A、B两组，在A组培养基中涂布一定量的链霉素，在B组培养基中涂布等量的卡那霉素和链霉素。往A组培养基中接种适量农杆菌，待长出菌落后，用影印法接种到B组培养基上，实验结果如图2，其中 1、31、3（填图中对应的数字）菌落对应的农杆菌可能是符合要求的，即含有 重组表达载体重组表达载体的农杆菌。
（5）通过植物组织培养技术培养农杆菌侵染的烟草叶片，获得烟草幼苗。欲从个体水平检测这些植株是否成功导入目的基因，方法是 将适量的棉铃虫和蚜虫接种到转基因植株上，观察是否抗虫将适量的棉铃虫和蚜虫接种到转基因植株上，观察是否抗虫。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】T4DNA连接酶；EcoRⅠ和HindⅢ；Ca2+；1、3；重组表达载体；将适量的棉铃虫和蚜虫接种到转基因植株上，观察是否抗虫
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：3引用：3难度：0.7
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