镰孢菌引起的小麦赤霉病被称为小麦“游症”,是威胁粮食安全的重大国际性难题。我国科学家从小麦近缘属植物长穗偃麦草中首次克隆出主效抗赤霉病基因Fhb7(编码一种谷胱甘肽S-转移酶),为解决小麦赤霉病的世界性难题提供了“金钥匙”。研究发现,用光诱导型启动子(PrbcS)能够使Fhb7基因表达,其结合T基因后能使Fhb7基因更高水平表达。
(1)PrbcS是一段有特殊结构的DNA片段,能被 RNA聚合酶RNA聚合酶识别并结合,驱动基因的持续 转录转录过程。
(2)通过PCR技术扩增Fhb7基因片段,反应过程一般由95℃热变性、55~60℃引物和模板配对、72℃延伸三个步骤,经过多次循环完成。延伸阶段选用72℃而非95℃综合考虑了两个因素,这两个因素是 防止DNA变性防止DNA变性和 保持Taq酶活性所需温度条件保持Taq酶活性所需温度条件。
(3)图中甲、乙均为Fhb7基因表达载体构建过程中的中间载体,请分析重组载体丙的部分构建过程。区别含有中间载体甲与含有重组载体丙的微生物的方法是 用含有卡那霉素的培养基培养用含有卡那霉素的培养基培养。经酶切后凝胶电泳,测得含2B基因片段长度为0.3kb,经图示信息分析,含光诱导型启动子-T基因的片段长度约为 1.8kb1.8kb。据图分析,形成重组载体丙,需要使用限制酶 HindШ和NotⅠHindШ和NotⅠ切割中间载体甲和乙,图中重组载体丙问号处有 66种限制酶的酶切位点。

(注:图中单词代表限制酶酶切位点)
【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】RNA聚合酶;转录;防止DNA变性;保持Taq酶活性所需温度条件;用含有卡那霉素的培养基培养;1.8kb;HindШ和NotⅠ;6
【解答】
【点评】
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发布:2024/4/20 14:35:0组卷:29引用:2难度:0.6
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