科研人员研究调控蔗糖转移酶基因（SUC2）的两种蛋白质Snf1和Snf2之间的相互作用的原理如下：真核细胞起始基因转录需要有转录激活因子的参与。酵母转录因子GAL4在结构上是组件式的，由DNA结构功能域（BD）和转录激活结构域（AD）组成。两个结构域分开时不能激活转录，只有当两者空间上接近时，才具有GAL4转录因子活性。BD与基因上游激活序列UAS结合后，激活AD与启动子结合，使启动子下游基因转录。如图1为研究相互作用的X蛋白和Y蛋白的机制模式图。
（1）操作中，需要用 限制酶和DNA连接限制酶和DNA连接酶将目的基因分别插入到酵母表达载体中，得到两种融合表达载体（如2图）。酶切时通常选用两种不同的酶，这样做的目的是 产生不同的黏性末端，保证目的基因按正确的方向连接；防止自身环化产生不同的黏性末端，保证目的基因按正确的方向连接；防止自身环化。
（2）酵母染色体上能被GAL4激活转录，显示两种蛋白质相互作用的基因称为报告基因。若用AUR1-C（抗生素AbA抗性基因）和HIS3（组氨酸合成基因）作为报告基因，那么作为被转化的酵母细胞在抗生素抗性和营养需求上应满足的条件是 无AbA抗性、组氨酸缺陷无AbA抗性、组氨酸缺陷。转化后需要在添加 AbA和不含组氨酸AbA和不含组氨酸的培养基上培养筛选。除此之外，还要将酵母的GAL4基因敲除，原因是 排除细胞内源转录因子GAL4的影响排除细胞内源转录因子GAL4的影响。
（3）LacZ基因编码产生的β-半乳糖苷酶可以分解X-gal产生蓝色物质，使菌落呈现蓝色；否则菌落为白色。科研人员采用LacZ作为报告基因，根据上述原理，验证了蛋白质Snf1和Snf2之间存在相互作用。写出实验思路并预期结果及推论。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶和DNA连接；产生不同的黏性末端，保证目的基因按正确的方向连接；防止自身环化；无AbA抗性、组氨酸缺陷；AbA和不含组氨酸；排除细胞内源转录因子GAL4的影响
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：27引用：4难度：0.7
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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