安莎霉素是一类主要由来源于海洋的稀有放线菌产生的次级代谢产物，具有较高的抗菌活性和药用价值。科研人员通常从深海采集淤泥样本，再分离、纯化并筛选出产安莎霉素的放线菌，其分离培养流程如图。请分析回答下列问题：
（1）过程①的接种方法为 稀释涂布平板法稀释涂布平板法。
（2）统计菌落种类和数量时要每隔24h观察统计一次，直到各类菌落数目稳定，以防止培养时间不足导致 遗漏菌落的种类和数目遗漏菌落的种类和数目。
（3）研究人员发现产安莎霉素的放线菌具有一个普遍的共性--氨基酸缺陷型。从筛选目的分析，基本培养基与完全培养基存在差异的成分是 氨基酸氨基酸。为了初步鉴定营养缺陷型放线菌菌株，科研人员进行了如下操作：
①用接种针挑取 菌落A菌落A（填“菌落A”或“菌落B”）接种于盛有完全液体培养的离心管中，28℃振荡培养3～5天后，离心取沉淀物，用无菌水洗涤3次制成菌悬液。
②吸取1mL菌悬液加入无菌培养皿中，倾注15mL融化开冷却至50℃左右的基本培养基，待其冷凝后用记号笔在皿底划分五个区域，标记A、B、C、D、E。
③在划分的五个区域上放入少量分组的氨基酸粉末（如下表所示），经培养后，观察生长圈出现的区域，从而确定属于何种氨基酸缺陷型。
| 组别 | 所含氨基酸 | ||||
| A | 组氨酸 | 苏氨酸 | 谷氨酸 | 赖氨酸 | 亮氨酸 |
| B | 精氨酸 | 天冬氨酸 | 赖氨酸 | 甲硫氨酸 | 苯丙氨酸 |
| C | 酪氨酸 | 谷氨酸 | 赖氨酸 | 色氨酸 | 丙氨酸 |
| D | 甘氨酸 | 天冬氨酸 | 苏氨酸 | 色氨酸 | 丝氨酸 |
| E | 半胱氨酸 | 亮氨酸 | 苯丙氨酸 | 丙氨酸 | 丝氨酸 |
苏氨酸
苏氨酸
缺陷型。（4）科研人员分离、纯化出产安莎霉素的放线菌后，需要利用PCR技术大量扩增其DNA上的16SrRNA保守片段，然后通过DNA序列比对进行菌种亲源关系的鉴定。查找数据库发现该放线菌的16SrRNA目的基因片段及相应限制酶识别序列如图所示：
| 限制酶 | EcoRⅠ | BamHⅠ | HindⅢ | SacⅠ |
| 识别序列和切割位点 | G↓AATTCG | G↓ATCC | A↓AGCTT | GAGCT↓C |
EcoRⅠ、SacⅠ
EcoRⅠ、SacⅠ
。得到目的基因以后就可以利用PCR技术对16SrRNA进行体外扩增，扩增目的基因的原理是 DNA半保留复制
DNA半保留复制
，此过程需要加入 热稳定DNA聚合酶
热稳定DNA聚合酶
催化。【答案】稀释涂布平板法；遗漏菌落的种类和数目；氨基酸；菌落A；苏氨酸；EcoRⅠ、SacⅠ；DNA半保留复制；热稳定DNA聚合酶
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：16引用：2难度：0.7
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1．回答下列关于微生物的问题．
阿拉伯胶是一种多糖，研究者从某地合欢树下距离地表深10～15cm处的土样中初筛到能合成阿拉伯胶降解酶的菌株SM01，以下为该菌株的鉴定过程．
（1）为获得单菌落，可采用平板划线法或法将初筛菌液接种在培养基上．46SM01菌落为粉白色，初期呈突起絮状，在显微镜下观察到，菌丝白色致密，且有分生孢子，细胞核直径约1μm,初步推测为真菌，则其特征中，最能说明SM01是真菌的是有细胞核，且有分生孢子．SM01还一定具有的结构有（多选）．
A．细胞膜 B．核糖体 C．拟核 D．荚膜
（2）表中培养液pH均为6.0，若对SM01中阿拉伯胶降解酶的活力进行测定，则应选用表中的培养液，针对不选用的其他培养液，分别说明原因：
①缺少，SM01不能很好生长
②具有，会影响对SM01自身产生的酶活力的测定结果
③缺乏，会影响SM01的生长，也无法对阿拉伯胶酶活力进行测定．
表 试验用培养液配方培养液 阿拉伯胶 阿拉伯胶酶 NaNO3 牛肉膏 K2SOPO4 MgSO4•7H2O KCl FeSO4•7H2O
A
25g/L__ __ __
g/L
g/L
g/Lg/L B
25g/L
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L
g/LC __ __
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/LD
25g/L__
g/L__
g/L
g/L
g/L
g/L发布：2025/1/2 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.5 -
2．丙草胺（C15H22ClNO2）是一种广泛应用的除草剂，能抑制土壤细菌、放线菌和真菌的生长。某研究小组从某地土壤中分离获得能有效降解丙草胺的细菌菌株，并对其计数（如图所示），以期为修复污染土壤提供微生物资源。下列叙述错误的是（ ）
发布：2024/12/31 4:0:1组卷：17引用：3难度：0.7 -
3．为了防治大气污染，烟气脱硫是环保领域迫切需要解决的问题．研究人员为了获得用于烟气脱硫的脱硫细菌，并了解其生长规律，进行了如下操作．请回答下列问题：
（1）采样与细菌的筛选：在某热电厂烟囱周围区域要尽量做到采集土样．为确保能够从样品中分离到所需要的烟气脱硫细菌，可以通过增加脱硫菌的浓度．
（2）驯化脱硫细菌：将筛选出的脱硫细菌接种于有少量无菌水的三角瓶中，边搅拌边持续通入SO2气体几分钟，然后接种到培养基上，待长出菌落后再重复上述步骤，并逐步延长通SO2的时间，同时逐步降低培养基的pH．此操作的目的是分离出的脱硫细菌．
（3）培养与观察：一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、温度及培养时间），驯化后的脱硫细菌表现出稳定的特征．用高倍显微镜（填“可以”或“不可以”）观察到脱硫细菌的核糖体．
（4）探究生长规律：在计数时，计数方法有稀释涂布平板法和直接计数法．在用稀释涂布平板法进行计数时，当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的；通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌，通常推测统计的菌落数往往比活菌的实际数目．发布：2025/1/1 8:0:2组卷：6引用：2难度：0.5
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