“实时荧光定量qPCR”是新冠疫情防控的一把利刃,通常在1~2h内即可得到检测结果。TaqMan探针是实时荧光定量RT-PCR技术中一种常用探针(如图1),其5′端连接荧光基团(R),3′端连接淬灭剂(Q)。当探针完整时,R发出的荧光信号被Q吸收而不发荧光。在PCR扩增过程中,当TaqDNA聚合酶遇到探针时会使探针水解而释放出游离的R和Q,R发出的荧光信号被相应仪器检测到,荧光信号的累积与PCR产物数量完全同步(如图2)。请据图回答:

(1)结合图1和图2分析,“荧光RT-PCR技术”所用的试剂盒中通常都应该含有 逆(反)转录逆(反)转录酶、TaqTaq酶、TaqMan探针、引物、dNTP、Mg2+、缓冲剂等。这种分子层面的荧光RT-PCR检测具有特异性和灵敏性都很高的特点,主要与试剂盒中的 引物引物、TaqMan探针TaqMan探针有关。
(2)根据TaqMan探针功能分析,探针中碱基序列的设计应主要依据 新冠病毒RNA内部的一段序列(新冠病毒RNA逆转录形成的DNA的部分序列)新冠病毒RNA内部的一段序列(新冠病毒RNA逆转录形成的DNA的部分序列)。新冠病毒(2019-nCoV)是冠状病毒大家庭中的新的一员,其碱基序列与引起SARS的冠状病毒碱基序列有79.5%的相似性,与流感病毒碱基相似度也较高,因此在设计TaqMan探针时应筛选出2019-nCoV特有序列,以避免 假阳性假阳性(填“假阴性”或“假阳性”)的出现。
(3)根据图1和图2,Taq DNA聚合酶除了能催化DNA子链的延伸,还能 催化RNA(TaqMan探针)的水解催化RNA(TaqMan探针)的水解。
(4)IgM和IgG均属于免疫球蛋白家族,是机体在抗原物质刺激下由浆细胞产生的抗体。IgM/IgG检测试剂盒的原理是 抗原抗体特异性结合抗原抗体特异性结合,通过检测人体内相应抗体间接证明是否感染。被病毒感染后,机体会产生一系列的变化来抵御这种入侵,其中IgM和IgG的含量会发生如图3所示变化。
通过对COVID-19患者研究发现,病毒侵入人体后,大约需要5~7天产生IgM抗体,IgG抗体在感染后10~15天时产生。通过检测外周血中IgM和IgG,不仅可以鉴别是否感染,还可以辨别检测者是近期感染或者是既往感染。当核酸检测结果为阳性,IgM(+)IgG(-)时,可判断检测者为 近期感染近期感染;已治愈的患者检测结果应为 核酸检测结果为阴性,IgM (-) IgG (+)核酸检测结果为阴性,IgM (-) IgG (+)。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定.
【答案】逆(反)转录;Taq;引物;TaqMan探针;新冠病毒RNA内部的一段序列(新冠病毒RNA逆转录形成的DNA的部分序列);假阳性;催化RNA(TaqMan探针)的水解;抗原抗体特异性结合;近期感染;核酸检测结果为阴性,IgM (-) IgG (+)
【解答】
【点评】
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发布:2024/6/27 10:35:59组卷:25引用:1难度:0.6
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