枯草芽孢杆菌盛产的蛋白酶，在生物医药和日用化工等生产领域具有重要的经济价值。为筛选枯草芽孢杆菌的蛋白酶高产株，将分别浸过不同菌株（a～e）的分泌物提取液及无菌水（f）的无菌圆纸片置于含某种高浓度蛋白质的平板培养基表面：在37℃温箱中放置2～3天，结果如图1．图2是枯草芽孢杆菌的蛋白酶和其它酶的热稳定性数据（酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其酶活性）。请回答问题：

（1）在培养包括枯草芽孢杆菌在内的异养型微生物时，培养基营养成分应包括水、

无机盐、碳源、氮源

无机盐、碳源、氮源

（填3种），配制图1培养基的基本步骤是计算→称量→

溶化

溶化

→灭菌→倒平板。
（2）大规模产业化生产应首选的菌株是

a

a

（用字母回答）：菌株b提取物周围没有形成明显清晰区的可能原因是

不能合成蛋白酶

不能合成蛋白酶

。
（3）在该蛋白的工业化生产过程中，通常需对发酵液在60～70℃保温一定时间，再制备酶制剂。在60～70℃保温一定时间的作用是

大幅度降低发酵液中其他酶的活性

大幅度降低发酵液中其他酶的活性

。
（4）欲从a菌株中提取和分离相关蛋白酶，一般步骤为

样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定（答完整给分）

样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定（答完整给分）

。分离出来的样品加入到

凝胶色谱柱

凝胶色谱柱

进行洗脱，待蛋白质接近色谱柱底端时用试管收集流出液。