苏云金芽孢杆菌中含有一种抗虫基因（Bt基因），通过产生苏云金芽孢杆菌伴孢晶体蛋白（Bt抗虫蛋白），破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。科学家将该细菌的“杀虫基因”转到棉花里，培育出了抗虫棉，让棉花也能产生Bt抗虫蛋白抵抗虫害。回答下列问题：
（1）可利用PCR技术获取并扩增Bt基因，前提是要有一段Bt基因的核苷酸序列，这是因为 有一段Bt基因的核苷酸序列才能设计引物有一段Bt基因的核苷酸序列才能设计引物。
（2）PCR与体内DNA复制相比，其特殊之处有 离体条件、无需解旋酶、需要高温、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）离体条件、无需解旋酶、需要高温、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）（写出两点）。若要由1个DNA分子复制8次，需要引物的数量为 254254个。
（3）Bt基因两端的酶切位点如图甲所示，图乙中质粒表达载体上的ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，小箭头表示酶切位点。
实际操作中，一般EcoRⅠ和BamHⅠ两种酶进行切割，与只采用EcoRⅠ切割相比，用两种酶切的优势一是避免 防止目的基因DNA片段和质粒自身环化防止目的基因DNA片段和质粒自身环化，二是避免造成反向连接。反向连接会导致目的基因表达出不同的蛋白质，原因是 转录是从启动子开始，到终止子结束，反向连接转录出的RNA序列不同，对应的氨基酸序列不同转录是从启动子开始，到终止子结束，反向连接转录出的RNA序列不同，对应的氨基酸序列不同。
（4）将基因表达载体导入农杆菌后，要用选择培养基进行筛选。已知未导入表达载体时农杆菌对青霉素和四环素均不具抗性，在不含抗生素的培养基（标记为A）中有经过转化的农杆菌单菌落（由一个菌体繁殖而成），挑取一部分菌接种到含有四环素的培养基（标记为A1）中培养，再挑取一部分菌接种到含有青霉素的培养基（标记为A2）中培养，若出现 A1上形成菌落，A2上不形成菌落A1上形成菌落，A2上不形成菌落结果，说明转化成功。
（5）转基因棉花是否培育成功还要对棉花进行 个体个体水平的检验。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】有一段Bt基因的核苷酸序列才能设计引物；离体条件、无需解旋酶、需要高温、耐高温的DNA聚合酶（Taq酶）；254；防止目的基因DNA片段和质粒自身环化；转录是从启动子开始，到终止子结束，反向连接转录出的RNA序列不同，对应的氨基酸序列不同；A1上形成菌落，A2上不形成菌落；个体
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：11引用：1难度：0.7
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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