阅读以下材料,回答(1)~(4)题。
自然界中的可再生资源来源广泛,含量丰富,种类多样,木聚糖在可再生资源中归属于半纤维素,其含量在可再生资源中仅次于纤维素。木聚糖是异质多糖,存在于植物细胞壁中,是一种多聚五碳糖,因此利用木聚糖首先需要将其降解为低聚木糖或者小分子的单糖形式,而这些能够降解木聚糖的酶则被称为木聚糖酶。
来源于微生物的木聚糖酶种类繁多,应用广泛,主要利用细菌和真菌发酵生产,因此构建产木聚糖酶工程菌有望使木聚糖酶在工业生产有更广泛的应用。在构建木聚糖酶工程菌的研究中,大多以大肠杆菌和毕赤酵母为宿主菌,但大肠杆菌和毕赤酵母的次级代谢产物均不能用于食品工业。枯草芽孢杆菌具有生长速度较快,对营养要求较低,对农作物安全,人畜无害,对环境友好等优点,属于食品级安全微生物,并且枯草芽孢杆菌有完善的分泌系统,可以分泌胞外酶。
枯草芽孢杆菌是一种商品化的有益菌,且已全基因组测序,此菌分泌多种脂肽类抗生素,研究发现含有新型脂肽类抗生素罗克霉素,loc基因负责罗克霉素的合成,其属于非核糖体肽合成酶途径基因,罗克霉素启动子ploc负责控loc基因的表达。枯草芽孢杆菌自身可以分泌木聚糖酶,但其分泌量较低且热稳定性不高,而热袍菌属的海栖热袍菌所产生的极耐热木聚糖酶的热稳定性高,其最适反应温度高达105℃,它的耐高温且热稳定性是工业化应用中的理想特征。
利用海栖热袍菌产生的木聚糖酶热稳定性高的特点,设计引物克隆极耐热木聚糖酶基因xynB和罗克霉素启动子ploc,并构建融合基因质粒载体,将其转化到枯草芽孢杆菌中,获得极耐热木聚糖酶高产重组枯草芽孢杆菌。
(1)木聚糖和木聚糖酶共有元素有 C、H、OC、H、O。
(2)利用枯草芽孢杆菌做受体细胞的优点有 生长速度快,对营养要求较低,对农作物安全,人畜无害,对环境友好生长速度快,对营养要求较低,对农作物安全,人畜无害,对环境友好。
(3)融合基因的检测:根据罗克霉素启动子ploc和海栖热袍菌木聚糖酶基因xynB特定序列设计引物,扩增ploc和xynB。下划线表示限制酶识别序列,“,”处为酶切位点。
引物 | 引物序列(5′→3′) | 对应的酶 |
PlocF | TTTGAGCT,CTTCTAATTAGGAAGAATACTTT | SacI |
PlocR | CACAGAAGGTAATATTTTCATTGATGAAGTCCTCATTAT | |
xynBF | ATAATGAGGACTTCATCAATGAAAATATTACCTTCTGTG | |
xynBR | TTTG,GATCCTCATTTTCTTTCTTCTATCTTT | BamHI |
TCGA
TCGA
,5至8依次是 GATC
GATC
。
(4)为鉴定重组枯草芽孢杆菌分泌极耐热木聚糖酶的能力,培养基中除木聚糖作为唯一碳糖反源外还要加入
氮源、无机盐和生长因子
氮源、无机盐和生长因子
等成分。将培养基分为三组,实验组接种工程菌,对照组1不进行处理,对照组2进行相应处理。在相同条件下培养一段时间后,检测培养基中木聚值聚糖的含量,结果(图乙)说明重组枯草芽孢杆菌分泌极耐热木聚糖酶的能力最强。对照组2的处理应为 升高其温度(高温处理)
升高其温度(高温处理)
。(5)如果将重组枯草芽孢杆菌分泌的极耐热木聚糖酶应用于生产,还需要做哪些研究?
验证其分泌的极耐热木聚糖酶的生物活性
验证其分泌的极耐热木聚糖酶的生物活性
。【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】C、H、O;生长速度快,对营养要求较低,对农作物安全,人畜无害,对环境友好;TCGA;GATC;氮源、无机盐和生长因子;升高其温度(高温处理);验证其分泌的极耐热木聚糖酶的生物活性
【解答】
【点评】
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