草甘膦是世界上使用最广泛的除草剂，转EPSPS基因抗除草剂水稻是中国科学院遗传与发育生物学研究所研发的水稻品种，靶标对象为草甘膦。回答下列问题：
（1）EPSPS基因一条链的两端序列如图1。
采用PCR技术获取和扩增EPSPS基因，需要使用的引物序列为 5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'（标出5′和3′端）。若PCR过程经过4次循环，需要的引物的数量为 3030个。
（2）如表为操作过程中可能用到的限制酶，图2为经切割得到的目的基因及末端（除黏性末端序列外，其他碱基序列省略），图3为要使用的质粒，其中的Tetr、Ampr为标记基因。
| 限制酶 | BamHⅠ | BclⅠ | SmaⅠ | Sau3AⅠ |
| 识别位点及切割位点 | -G↓GATCC- | -T↓GATCG- | -CCC↓GGG- | -↓GATC- |
农杆菌转化法
农杆菌转化法
，作为表达载体，除图中结构，未标注的结构为 启动子
启动子
。对质粒进行切割时，选用的两种酶为 BclⅠ和SmaⅠ
BclⅠ和SmaⅠ
。（3）植物激素是植物体内产生，能从产生部位运送到作用部位，对植物的
生长发育有显著影响
生长发育有显著影响
的微量有机物，将导入EPSPS基因的细胞进行组织培养时，所用培养基中需要添加植物激素，若要探究生长素和细胞分裂素的比例（比值为1、比值大于1、比值小于1）对培养结果产生的影响。实验思路为 取4组已灭菌的装有MS培养基的锥形瓶，不同组别培养基的差异为不添加任何植物激素，生长素用量与细胞分裂素用量的比值为1，比值大于1以及比值小于1，其他条件相同且适宜，观察外植体的生长发育情况
取4组已灭菌的装有MS培养基的锥形瓶，不同组别培养基的差异为不添加任何植物激素，生长素用量与细胞分裂素用量的比值为1，比值大于1以及比值小于1，其他条件相同且适宜，观察外植体的生长发育情况
。【答案】5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'；30；农杆菌转化法；启动子；BclⅠ和SmaⅠ；生长发育有显著影响；取4组已灭菌的装有MS培养基的锥形瓶，不同组别培养基的差异为不添加任何植物激素，生长素用量与细胞分裂素用量的比值为1，比值大于1以及比值小于1，其他条件相同且适宜，观察外植体的生长发育情况
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：22引用：2难度：0.7
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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