在含有X-gal和IPTG物质的培养基上，大肠杆菌质粒上的lacZ′基因如表达出产物β-半乳糖苷酶，则能使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色．基因工程中常利用该原理从导入质粒的受体细胞中筛选出真正导入重组质粒的细胞．请据图回答：
（1）限制酶EcoRI的识别序列和酶切位点是-G↓，AATTC-，SmaI的识别序列和酶切位点是-CCC↓GGG-，图中目的基因被切割下来和质粒连接之前，需在目的基因的右侧连接相应的末端，连接的末端序列是-TTAA-TTAA．限制酶EcoRI在质粒上的酶切位点在lacZ′基因中，故该基因工程中，lacZ′基因的作用为标记标记基因．
（2）获取目的基因后，常利用PCRPCR技术在体外将其大量扩增，此过程需要一种特殊的酶叫Taq酶（或“耐高温的DNA聚合酶”）Taq酶（或“耐高温的DNA聚合酶”）．
（3）转化过程中，大肠杆菌应先用Ca2+（或CaCl2溶液）Ca2+（或CaCl2溶液）处理，使其成为感受态感受态细胞．
（4）颜色为白色的是含有目的基因的菌落，原因是lacZ‘标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出β-半乳糖苷酶，故菌落为白色lacZ‘标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出β-半乳糖苷酶，故菌落为白色．
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】-TTAA；标记；PCR；Taq酶（或“耐高温的DNA聚合酶”）；Ca2+（或CaCl2溶液）；感受态；lacZ‘标记基因区插入外源基因后被破坏，不能表达出β-半乳糖苷酶，故菌落为白色
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：24引用：2难度：0.3
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