血栓对健康有极大危害。来源于金黄色葡萄球菌的天然葡激酶（SAK）是一种新型溶栓制剂，因易诱发免疫反应而严重限制了应用。人HC蛋白参与免疫抑制反应，对机体保护性的免疫调节有着重要作用。研究人员预测，将SAK与人HC蛋白融合形成的SAK-HC融合蛋白不仅能够发挥高效溶栓作用，且能降低机体免疫系统对葡激酶的反应，这将具有极大的临床应用前景。
（1）获取SAK-HC融合基因。设计引物分别扩增SAK基因和HC基因，其中HC基因的引物D中增加了一段与SAK基因相同的序列。SAK基因扩增时引物（F和N）位置如图1所示，请在方框内绘制出HC基因扩增的引物（D和R）位置。将得到的SAK基因和HC基因1：1混合，经再次扩增即可得到SAK-HC融合基因。
（2）利用 限制酶和DNA连接限制酶和DNA连接酶将融合基因与质粒构建基因表达载体，转化经 Ca2+Ca2+处理的大肠杆菌。筛选、培养大肠杆菌，提取质粒进行电泳分析（图2），结果显示融合基因已成功导入大肠杆菌，理由是 转基因大肠杆菌提取出的质粒经酶切后的电泳结果中存在与融合基因PCR的电泳结果相同的片段转基因大肠杆菌提取出的质粒经酶切后的电泳结果中存在与融合基因PCR的电泳结果相同的片段，为保证检测结果的准确性，还应对重组质粒酶切的产物进行 DNA测序DNA测序。
（3）培养转化成功的大肠杆菌一段时间后，破裂细胞、提取纯化融合蛋白并用缓冲液稀释，进行活性鉴定。培养基中加入纤维蛋白原、纤溶酶原、凝血酶等模拟血栓形成，摇匀至浑浊立即倒平板，用打孔器在冷却的平板上打加样孔，并加入不同的样品，结果如图3。据图判断，表中a、b分别是 SAK-HC融合蛋白SAK-HC融合蛋白、样品稀释缓冲液样品稀释缓冲液。一段时间后测量培养基上 透明圈直径大小透明圈直径大小，由结果可知 融合蛋白与传统溶栓药物尿激酶及其他方式改造的葡激酶的活性相当融合蛋白与传统溶栓药物尿激酶及其他方式改造的葡激酶的活性相当，说明融合蛋白具有进一步临床应用研究的价值。
| 加样孔 | 样品 | 剂量 |
| 1 | 传统溶栓药物尿激酶 | 10μL |
| 2 | 传统溶栓药物尿激酶 | 20μL |
| 3 | a | 10μL |
| 4 | a | 20μL |
| 5 | 其他方式改造的葡激酶 | 10μL |
| 6 | 其他方式改造的葡激酶 | 20μL |
| 7 | b | 20μL |
设计葡激酶的第77位精氨酸替换为其它氨基酸→根据新的葡激酶氨基酸序列推测葡激酶基因的碱基序列→改造或合成新的葡激酶基因→将新的葡激酶基因通过基因工程转化大肠杆菌→获得新型葡激酶
设计葡激酶的第77位精氨酸替换为其它氨基酸→根据新的葡激酶氨基酸序列推测葡激酶基因的碱基序列→改造或合成新的葡激酶基因→将新的葡激酶基因通过基因工程转化大肠杆菌→获得新型葡激酶
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】限制酶和DNA连接；Ca2+；转基因大肠杆菌提取出的质粒经酶切后的电泳结果中存在与融合基因PCR的电泳结果相同的片段；DNA测序；SAK-HC融合蛋白；样品稀释缓冲液；透明圈直径大小；融合蛋白与传统溶栓药物尿激酶及其他方式改造的葡激酶的活性相当；设计葡激酶的第77位精氨酸替换为其它氨基酸→根据新的葡激酶氨基酸序列推测葡激酶基因的碱基序列→改造或合成新的葡激酶基因→将新的葡激酶基因通过基因工程转化大肠杆菌→获得新型葡激酶
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：14引用：1难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
