新冠病毒在人体细胞表面蛋白受体由ACE2控制表达，该基因的开放阅读框（mRNA 从起始密码子到终止密码子之间的核苷酸序列）cDNA序列大小为2418bp（bp表示碱基对），在280bp和1070bp位点分别有一个HindⅢ和Xho I酶切位点（图1）。甲、乙两位同学通过分子生物学方法克隆该基因到 pMD18-T载体（图2）中，各自的测序结果如图4，并进一步通过双酶切获得ACE2基因编码序列与pEGFP-N1（图2）载体重组（MCS多酶切位点序列如图3所示）并表达。试分析回答下列问题：

（1）根据图2可知，两种载体都具有的基本结构有

复制原点

复制原点

和

标记基因

标记基因

限制酶切割位点。
（2）ACE2基因与pMD18-T载体构建的重组质粒经转化后细胞需要在含氨苄青霉素的培养基中筛选的原因是

载体上含有氨苄青霉素抗性基因Amp^r

载体上含有氨苄青霉素抗性基因Amp^r

。
（3）甲、乙两位同学均得到ACE2基因的PCR产物与pMD18-T载体的重组质粒，针对ACE2基因的部分测序结果如图4，并进一步利用图4中标记的限制酶进行双酶切，获得ACE2基因编码序列，同时用相同限制酶酶切 pEGFP-N1载体，然后构建重组质粒。两位同学对获得的重组质粒进行酶切检测：①甲同学只得到空载体；②乙同学在重组质粒中检测到了1348 bp 部分目的基因片段。请对该实验结果进行分析：
①

甲同学用BglⅡ和BamHⅠ两种限制酶酶切ACE2与pMD18-T载体构建的重组质粒后，5’端均突出—GATC，产生相同的黏性末端，载体pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ两种限制酶双酶切后，可以自连，很难在连接体系中与其他DNA片段形成重组质粒

甲同学用BglⅡ和BamHⅠ两种限制酶酶切ACE2与pMD18-T载体构建的重组质粒后，5’端均突出—GATC，产生相同的黏性末端，载体pEGFP-N1用BglⅡ和BamHⅠ两种限制酶双酶切后，可以自连，很难在连接体系中与其他DNA片段形成重组质粒

。
②

乙同学用XhoⅠ和BamHⅠ两种限制酶酶切ACE2与pMD18-T载体构建的重组质粒。已知ACE2基因编码序列含有2418bp,ACE2基因在开放阅读框1070bp处还有一个XhoⅠ酶切位点，酶切后便可以得到一个1348bp（2418—1070=1348）的大片段与载体pEGFP-N1双酶切后的大片段连接构建重组质粒

乙同学用XhoⅠ和BamHⅠ两种限制酶酶切ACE2与pMD18-T载体构建的重组质粒。已知ACE2基因编码序列含有2418bp,ACE2基因在开放阅读框1070bp处还有一个XhoⅠ酶切位点，酶切后便可以得到一个1348bp（2418—1070=1348）的大片段与载体pEGFP-N1双酶切后的大片段连接构建重组质粒

。