大肠杆菌是发酵工程常用的微生物，特定的重组大肠杆菌生产乳酸效率比乳酸菌更高，杂菌污染是导致大肠杆菌大规模发酵失败的重要原因。研究人员利用基因工程获得了相关的工程菌用于大规模生产乳酸。回答下列问题。

（1）如图甲所示，从培养基的营养构成上分析，大肠杆菌能以培养基中的葡萄糖为

碳源

碳源

，通过细胞呼吸的第一阶段将其分解为

丙酮酸

丙酮酸

（物质A），进而发酵产生乳酸，同时还有乙酸、琥珀酸等副产物。
（2）科学家利用重组片段和特定技术敲除原始菌株拟核上的F酶基因，获得更高效的乳酸发酵工程菌，过程如图乙。重组片段上的庆大霉素抗性基因（Gm^r）除了能替换掉拟核上的F酶基因，还起到

作为标记基因，用于筛选出F基因敲除突变菌株

作为标记基因，用于筛选出F基因敲除突变菌株

的作用，综合图甲和图乙信息，实际发酵使用的菌株要将引入的Gm^r去除外，还要对该工程菌的进一步改造，改造是思路是：

用相同方法获得F酶、T酶双基因敲除菌株（用相同方法敲除T酶基因）

用相同方法获得F酶、T酶双基因敲除菌株（用相同方法敲除T酶基因）

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（3）研究人员利用基因工程技术，使甲酰胺酶基因和亚磷酸脱氢酶基因在大肠杆菌中同时表达，改造出一种加强型大肠杆菌，可以通过控制培养基中的氮源和磷源种类实现高效抑制杂菌污染的目的。
①构建甲酰胺酶基因和亚磷酸脱氢酶基因融合表达载体后，导入表达载体前需先将大肠杆菌处理为

感受态

感受态

细胞。对照组大肠杆菌需要导入

空载体（不含目的基因的空载体）

空载体（不含目的基因的空载体）

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②甲酰胺酶能催化甲酰胺生成铵盐，亚磷酸脱氢酶能催化亚磷酸盐生成磷酸盐，分别可作为大肠杆菌的氮源和磷源。迄今为止，在自然界中还没有发现能同时表达甲酰胺酶基因和亚磷酸脱氢酶基因的微生物。利用加强型大肠杆菌发酵时，为了有效减少杂菌污染，配制培养基时采取的措施是

以甲酰胺为唯一氮源，以亚磷酸盐为唯一磷源

以甲酰胺为唯一氮源，以亚磷酸盐为唯一磷源

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