研究者拟构建高效筛选系统，将改进的苯丙氨酸合成关键酶基因P1导入谷氨酸棒杆菌，以提高苯丙氨酸产量。

（1）如图是该高效筛选系统载体的构建过程。载体1中含有Kan^R（卡那霉素抗性基因）和SacB两个标记基因，为去除筛选效率较低的SacB，应选择引物

1

1

和

4

4

，并在引物的

5′

5′

（5′∕3′）端引入XhoⅠ酶识别序列，进行PCR扩增，产物经酶切、连接后环化成载体2。
（2）PCR扩增载体3中筛选效率较高的标记基因RpsL（链霉素敏感基因）时，引物应包含

XhoⅠ

XhoⅠ

（EcoRⅠ∕HindⅢ∕XhoⅠ）酶识别序列，产物经单酶切后连接到载体2构建高效筛选载体4。
（3）将改进的P1基因整合到载体4构建载体5。将载体5导入链霉素不敏感（由RpsL突变造成）、卡那霉素敏感的受体菌。为获得成功导入载体5的菌株，应采用含有

卡那霉素

卡那霉素

的平板进行初步筛选。
（4）用一定的方法筛选出如下菌株：P1基因脱离载体5并整合到受体菌拟核DNA，且载体5上其他DNA片段全部丢失。该菌的表型为

B

B

。
A．卡那霉素不敏感、链霉素敏感
B．卡那霉素敏感、链霉素不敏感
C．卡那霉素和链霉素都敏感
D．卡那霉素和链霉素都不敏感
（5）可采用

PCR

PCR

技术鉴定成功整合P1基因的菌株。之后以发酵法检测苯丙氨酸产量。