图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。请回答下列问题：
（1）若用限制酶SmaⅠ完全切割图1中DNA片段，其产物长度为

537bp、790bp、661bp

537bp、790bp、661bp

。
（2）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d。从隐性纯合子分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，产物中共有

2

2

种不同DNA片段。为了提高实验成功率，需要通过

PCR

PCR

技术扩增目的基因，以获得目的基因的大量拷贝，该技术原理为

DNA双链复制

DNA双链复制

。

（3）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是

BamHⅠ

BamHⅠ

。在导入重组质粒后，为了筛选出含质粒的大肠杆菌，一般需要用添加

抗生素B

抗生素B

的培养基进行培养，想进一步筛选出含重组质粒的受体细胞，还需要接种到含

抗生素A

抗生素A

的培养基中培养。
（4）假设用BamHⅠ切割DNA获取目的基因，用MboⅠ切割质粒，然后形成重组质粒，若将插入在抗生素B抗性基因处的目的基因重新切割下来，能否再次用BamHⅠ

不一定

不一定

（填：可以、不可以、不一定），原因是：

因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处不一定出现GGATCC

因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处不一定出现GGATCC

。