哺乳动物细胞产生的酶M在工业上极具应用价值，现拟利用大肠杆菌大规模生产该酶。下图1为根据哺乳动物细胞中酶M基因合成的cDNA序列（加在cDNA两侧的限制酶识别序列不影响基因的正确表达），图2为质粒pXY6的结构示意图，其中VanR为万古霉素抗性基因，GFP基因编码绿色荧光蛋白，大肠杆菌中不具有这两种基因。限制酶NsiⅠ、PstⅠ、SbfⅠ、BclⅠ和BspEⅠ识别序列及切割位点分别为ATGCA↓T、CTGCA↓G、CCTGCA↓GG、T↓GATCA和T↓CCGGA。请回答下列问题：
（1）将哺乳动物的酶M基因直接导入大肠杆菌中，合成的蛋白质的氨基酸序列较酶M长，可能的原因是 酶M基因中含有内含子序列，在真核细胞转录后会切除，而大肠杆菌中不会被切除酶M基因中含有内含子序列，在真核细胞转录后会切除，而大肠杆菌中不会被切除。因此，基因工程中通常采用目的基因的cDNA形式；与细胞中的基因相比，cDNA不具有 启动子和终止子（或非编码区）启动子和终止子（或非编码区）等结构，便于在原核细胞中表达出与真核细胞基因相同的蛋白质。
（2）基因工程的核心步骤为 基因表达载体的构建基因表达载体的构建；图示cDNA与质粒的连接，需要先选择 NsiⅠ和PstⅠNsiⅠ和PstⅠ酶切cDNA和 SbfⅠSbfⅠ酶切pXY6，酶切产物再通过 DNA连接酶DNA连接酶连接。
（3）将重组质粒导入提高大肠杆菌，常用 Ca2+Ca2+处理，使其处于感受态。在选择符合生产要求的重组质粒过程中，在含万古霉素的培养基中能生长的为导入 重组质粒和pX6重组质粒和pX6质粒的大肠杆菌。
（4）若用限制酶BspEⅠ、PstⅠ和BclⅠ完全酶切符合生产要求的重组质粒，可得到 55种DNA片段。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】酶M基因中含有内含子序列，在真核细胞转录后会切除，而大肠杆菌中不会被切除；启动子和终止子（或非编码区）；基因表达载体的构建；NsiⅠ和PstⅠ；SbfⅠ；DNA连接酶；Ca2+；重组质粒和pX6；5
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：3引用：1难度：0.6
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
