研究发现物质X与肝细胞膜上Y蛋白结合可促进某动物肝脏细胞的增殖,请设计相应的实验方案验证该发现。
实验材料与用具:正常肝脏细胞、Y蛋白基因敲除的肝脏细胞(Y蛋白基因敲除的肝脏细胞增殖能力有所降低)、X物质溶液、培养液、比浊计及其他实验所需试剂、材料和用具。
(说明:答题时不考虑加入X后的体积变化等误差,X与Y蛋白不结合时对细胞无影响。提供的细胞均具有分裂能力,只进行原代培养且培养条件适宜,比浊计使用方法不做要求)
(1)实验思路:
①取培养瓶若干个,分组并编号如下:
A、C组:等量的细胞培养液+正常肝脏细胞;
B、D组:等量的细胞培养液+Y蛋白基因敲除的肝脏细胞。
每组设置若干个重复样品。培养12小时后,在A、B两组中分别加入 等量的物质X等量的物质X。
②各组样品在 CO2培养箱CO2培养箱中培养,每隔6小时各取其中的几个样品,用比浊计测定浑浊度并记录数据用比浊计测定浑浊度并记录数据。由于动物细胞培养时 贴壁生长贴壁生长难以形成细胞悬液,所以需加入胰蛋白酶并摇匀后再测定。
③24小时后结束实验统计分析数据,并以此数据为纵坐标绘制曲线。
(2)请用曲线图预测实验结果。
(3)分析与讨论:
a.物质X能与Y蛋白特异性结合,与Y蛋白的 空间结构/构象空间结构/构象有关。
b.本实验的检测指标能反映细胞增殖情况的依据是 一定范围内,细胞数目与浑浊度呈正相关/细胞数目越多,对光的吸收越多,浑浊度越大一定范围内,细胞数目与浑浊度呈正相关/细胞数目越多,对光的吸收越多,浑浊度越大,也可用 血细胞计数板/血细胞计数法血细胞计数板/血细胞计数法进行细胞计数。
【考点】动物细胞培养的条件与过程.
【答案】等量的物质X;CO2培养箱;用比浊计测定浑浊度并记录数据;贴壁生长;空间结构/构象;一定范围内,细胞数目与浑浊度呈正相关/细胞数目越多,对光的吸收越多,浑浊度越大;血细胞计数板/血细胞计数法
【解答】
【点评】
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