水稻不育系的选育是杂交水稻育种工作中的关键环节。为了获得某水稻品种的不育系，研究人员对该水稻品种的TMS5基因进行编辑，基因编辑过程如图。
（1）Cas9蛋白对TMS5基因剪切后（a），断裂后的DNA分子会自动进行修复，修复过程中在b所示位点插入碱基A之后两个片段在

DNA连接酶

DNA连接酶

酶作用下得到编辑成功的TMS5基因，此过程导致的变异属于

基因突变

基因突变

。
（2）在编辑成功的TMS5基因上游连接启动子，可作为

RNA聚合酶

RNA聚合酶

识别和结合的部位，后组装形成基因表达载体。再通过农杆菌侵染水稻愈伤组织，并整合到水稻细胞的

染色体DNA

染色体DNA

上，愈伤组织再经过

再分化

再分化

过程形成水稻幼苗。
（3）基因编辑中插入碱基A，会导致翻译提前终止，使TMS5基因表达的蛋白质不能产生，最终导致水稻花粉不育。用抗原—抗体杂交技术检测TMS5基因编辑是否成功，若

未出现

未出现

（填“出现”或“未出现”）杂交带，则表明基因编辑成功。
（4）华人科学家张锋是首个将CRISPR基因编辑技术应用于哺乳动物和人类细胞的科学家，为此项技术广泛应用于生命科学和医学领域做出了不可磨灭的贡献。但是更多的学者提出了CRISRP/Cas9基因编辑技术有时存在编辑对象出错而造成“脱靶”，实验发现RNA的序列长短影响成功率，越短脱靶率越

高

高

。试分析脱靶最可能的原因：

其他DNA序列也含有与向导RNA互补配对的序列，造成向导RNA错误结合而脱靶

其他DNA序列也含有与向导RNA互补配对的序列，造成向导RNA错误结合而脱靶

。