图1表示CRISPR/Cas9基因编辑的主要作用机理，通过对靶基因的剪切和DNA自我修复可实现靶基因的定点突变。图2是FANCM基因结构示意图，FANCM蛋白能阻止减数分裂过程中交叉互换的发生。科研人员通过构建CRISPR/Cas9重组表达载体，以生菜嫩叶作外植体，经农杆菌转化，培育出FANCM基因的突变纯合新品种。请回答下列问题：
（1）组成FANCM基因外显子和内含子的基本组成单位是 脱氧核苷酸脱氧核苷酸。根据图2靶序列设计的gRNA中相应序列是5′-UUGUAUACCAUGAGCUGAAAGG-UUGUAUACCAUGAGCUGAAAGG--3′。
（2）构建 CRISPR/Cas9重组表达载体时主要利用的工具酶有 DNA连接酶和限制酶DNA连接酶和限制酶。研究中需要将gRNA和Cas9基因序列均插入到Ti质粒的T-DNA内部，其目的是 T-DNA可以插入到受体细胞T-DNA可以插入到受体细胞。
（3）科研人员将 CRISPR/Cas9重组表达载体导入农杆菌时，为提高导入成功率，常利用CaCl2处理农杆菌，其目的是 使农杆菌成为感受态，易于接受环境中的DNA分子使农杆菌成为感受态，易于接受环境中的DNA分子。将转化的农杆菌接种到液体培养基中，在220r•min-1、28℃条件下摇床培养10～12h,其目的是 使农杆菌恢复常态，易于大量培养增殖使农杆菌恢复常态，易于大量培养增殖。
（4）科研人员通过对生菜细胞中FANCM基因测序确定突变株，如表是野生型生菜和实验获得的生菜植株（T0）的相关测序结果。
| 野生型生菜 | 5′-AAAGCTCCTTTCAGCTCATGGTATACAACCAGCATTTGAT-3′ |
| T0植株 | 5′-AAAGCTCCTTTCAGCTCATGGTATACAACCAGCATTTGAT-3′ |
| 5′-AAAGCTCCTTTCATCATGGTATACAACCAGCATTTGAT-3′ |
缺失
缺失
。若T.植株连续自交两代，则F2中突变纯合体占比为 3
8
3
8
②获得的FANCM基因突变纯合体在遗传育种中的应用价值是
增加杂交育种过程中基因重组的频率，产生更多新品种，加速生菜育种进程
增加杂交育种过程中基因重组的频率，产生更多新品种，加速生菜育种进程
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】脱氧核苷酸；UUGUAUACCAUGAGCUGAAAGG-；DNA连接酶和限制酶；T-DNA可以插入到受体细胞；使农杆菌成为感受态，易于接受环境中的DNA分子；使农杆菌恢复常态，易于大量培养增殖；缺失；；增加杂交育种过程中基因重组的频率，产生更多新品种，加速生菜育种进程
3
8
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：54引用：3难度：0.6
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
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