2020年诺贝尔化学奖授予了两位开发出CRISPR/Cas9基因编辑技术的科学家，该技术在实体瘤研究中得到广泛应用。Cas9蛋白可以结合一段sgRNA，这段sgRNA可以引导Cas9蛋白部分与特定的DNA序列结合，最终实现对靶基因序列的编辑。
（1）CRISPR/Cas9系统中的Cas9蛋白与sgRNA结合后对特定的DNA序列识别并在PAM序列（几乎存在于所有基因中）上游切割，其功能类似于基因工程工具酶中的

限制酶（限制性核酸内切酶）

限制酶（限制性核酸内切酶）

。研究发现，CRISPR/Cas9系统在自然界中仅存在于原核生物中，故需要借助

基因工程（转基因）

基因工程（转基因）

技术才能在真核细胞中发挥作用。分析该系统在细菌体内可能的生理作用是

切割外源DNA，保护自身

切割外源DNA，保护自身

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（2）结直肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，研究发现APC基因发生突变引起的结肠和直肠腺瘤性息肉与结直肠癌密切相关。利用该技术可敲除APC基因获得APC基因缺失的结肠细胞，通过黏膜注射，将APC基因缺失结肠细胞原位移植入免疫缺陷小鼠，生成腺瘤，获得结直肠癌小鼠模型，请写出该模型的一种应用

研究药物对结直肠癌治疗效果；研究结直肠癌的发病机理

研究药物对结直肠癌治疗效果；研究结直肠癌的发病机理

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（3）2019 年上海科研团队通过基因编辑技术切除猕猴受精卵中的生物节律核心基因BMAL1，再利用体细胞克隆技术，获得了5只 MAL1基因敲除的克隆猴。这是国际上首次成功构建出的一批遗传背景一致的生物节律紊乱的猕猴模型。在个体水平鉴定BMAL1基因敲除成功的方法是观察猕猴是否表现为

生物节律紊乱

生物节律紊乱

，该团队利用一只BMAL1缺失的成年猕猴体细胞克隆出5只后代的实验中，涉及的生物技术有

动物体细胞核移植、动物细胞培养、早期胚胎培养、胚胎移植

动物体细胞核移植、动物细胞培养、早期胚胎培养、胚胎移植

（答出两项即可）。
（5）CRISPR/Cas9基因编辑技术有时存在“脱靶”现象，即编辑了不该编辑的基因，试从引导RNA的角度分析脱靶的原因：

其它DNA片段上也含有与引导RNA互补配对的序列，造成编辑对象出错而脱靶

其它DNA片段上也含有与引导RNA互补配对的序列，造成编辑对象出错而脱靶

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