某种类型的白血病由蛋白P引发，蛋白UBC可使P被蛋白酶识别并降解，药物A可通过影响这一过程对该病起到治疗作用。为探索药物A治疗该病的机理，需构建重组载体以获得融合蛋白FLAG-P和FLAG-P△。P△是缺失特定氨基酸序列的P，FLAG是一种短肽，连接在P或P△的氨基端，使融合蛋白能与含有FLAG抗体的介质结合，但不影响P或P△的功能。
（1）为构建重组载体，需先设计引物，通过PCR特异性扩增P基因。用于扩增P基因的引物需满足的条件是

两种引物分别与两条模板链3'端的碱基序列互补配对

两种引物分别与两条模板链3'端的碱基序列互补配对

。为使PCR产物能被限制酶切割，需在引物上添加相应的限制酶识别序列，该限制酶识别序列应添加在引物的

5'端

5'端

（填“3′端”或“5′端”）。
（2）PCR扩增得到的P基因经酶切连接插入载体后，与编码FLAG的序列形成一个融合基因，如图甲所示，其中“ATGTGCA”为P基因编码链起始序列。将该重组载体导入细胞后，融合基因转录出的mRNA序列正确，翻译出的融合蛋白中FLAG的氨基酸序列正确，但P基因对应的氨基酸序列与P不同。据图甲分析，出现该问题的原因是

在转录得到的mRNA序列中，EcoRⅠ识别序列的后两个碱基与P基因对应的第一个碱基构成一个密码子，导致翻译时核糖体读取的密码子顺序发生改变，从而使翻译出的氨基酸序列改变

在转录得到的mRNA序列中，EcoRⅠ识别序列的后两个碱基与P基因对应的第一个碱基构成一个密码子，导致翻译时核糖体读取的密码子顺序发生改变，从而使翻译出的氨基酸序列改变

。修改扩增P基因时使用的带有EcoRⅠ识别序列的引物来解决该问题，具体修改方案是

在EcoRⅠ识别序列前后增加碱基，使融合基因中FLAG基因的碱基数目加上P基因的碱基数为3的倍数，从而保证翻译时P基因转录出的mRNA也能被正确读取

在EcoRⅠ识别序列前后增加碱基，使融合基因中FLAG基因的碱基数目加上P基因的碱基数为3的倍数，从而保证翻译时P基因转录出的mRNA也能被正确读取

。

（3）融合蛋白表达成功后，将FLAG-P、FLAG-P△、药物A和UBC按照图乙中的组合方式分成5组。各组样品混匀后分别流经含FLAG抗体的介质，分离出与介质结合的物质并用UBC抗体检测，检测结果如图丙所示。已知FLAG-P和FLAG-P△不能降解UBC，由①②③组结果的差异推测，药物A的作用是

促进UBC与FLAG-P的结合

促进UBC与FLAG-P的结合

；由②④组或③⑤组的差异推测，P△中缺失的特定序列的作用是

P△中缺失的特定序列是与UBC结合的关键序列

P△中缺失的特定序列是与UBC结合的关键序列

。

（4）根据以上结果推测，药物A治疗该病的机理是

药物A促进UBC与P的结合，从而促进蛋白P被蛋白酶识别并降解，达到治疗的目的

药物A促进UBC与P的结合，从而促进蛋白P被蛋白酶识别并降解，达到治疗的目的

。