针对新冠病毒（SARS-CoV-2）的重组蛋白疫苗、核酸疫苗（包括 DNA疫苗和 RNA疫苗）等疫苗都在研发当中。如图为其中一种疫苗的研发思路，图中①～⑦表示过程，虚线箭头表示 NcoⅠ、SphⅠ、NheI、BamHⅠ的酶切位点（四种酶的识别序列详见表），标记基因 SUC2控制合成蔗糖酶，使 P型酵母菌能利用培养基中的蔗糖生存。

限制酶	NcoⅠ	SphⅠ	NheⅠ	BamHⅠ
识别序列和切割位点	C↓CATGG	GCATG↓C	G↓GATCC	G↓CTAGC

（1）图中①过程需要使用

逆转录

逆转录

酶先得到cDNA，再使用

PCR（聚合酶链式反应）

PCR（聚合酶链式反应）

技术扩增得到S基因。
（2）为使③过程顺利进行，需先使用限制酶

Ncol

Ncol

和

Nhel

Nhel

切割质粒B，选用两种限制酶对新冠病毒的S基因进行切割的目的是

防止S基因自身环化、防止S基因与运载体反向连接

防止S基因自身环化、防止S基因与运载体反向连接

（答出1点即可）。
（3）图中表示筛选的过程是

⑤

⑤

（填编号），筛选时应使用以

蔗糖

蔗糖

为唯一碳源的培养基。
（4）重组疫苗注入志愿者体内后，S蛋白基因指导合成的S蛋白作为

抗原

抗原

，刺激机体产生能与之相结合的抗体，抗体的分泌量可作为检测疫苗对志愿者免疫效果的指标。参加临床试验的志愿者需要满足的条件之一是

无

无

（选填“有”或“无”）SARS-C。V-2感染史，理由是

有SARS-CoV-2感染史的志愿者血清中会存在一定量的相应抗体，对试验结果产生干扰

有SARS-CoV-2感染史的志愿者血清中会存在一定量的相应抗体，对试验结果产生干扰

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