黄曲霉毒素主要是由黄曲霉和寄生曲霉等多种真菌产生的次级代谢产物，包括AFB₁、AFB₂、AFG₁等多种衍生物。黄曲霉毒素的毒性强，具有抑制免疫、诱导突变和致癌的作用，香豆素是黄曲霉毒素的结构类似物。黄曲霉毒素的生物去除法是利用微生物分泌的酶降解黄曲霉毒素，产生低毒或无毒的降解产物。研究人员为筛选高效降解黄曲霉毒素的菌株，开展了相关的研究。回答下列问题：
（1）配制的富集培养基和初筛平板培养基，常用

高压蒸汽灭菌

高压蒸汽灭菌

法进行灭菌。富集培养基的成分：香豆素0.1%、（NH₄）₂SO₄0.5%、NaCl0.85%、pH7.0；初筛平板培养基的成分：香豆素0.1%、（NH₄）₂SO₄0.5%、KH₂PO₄0.25%、MgSO₄0.1%、Na₂HPO₄•12H₂O 0.05%、CaCl₂ 0.01%、琼脂2%、pH6.5。香豆素可用于筛选目的菌的原因是

香豆素的化学结构与黄曲霉毒素的类似，作为唯一碳源可使目的菌能够生长而其他微生物生长受到抑制

香豆素的化学结构与黄曲霉毒素的类似，作为唯一碳源可使目的菌能够生长而其他微生物生长受到抑制

。初筛平板培养基中无机物的主要作用是

提供无机盐和维持培养基的pH稳定

提供无机盐和维持培养基的pH稳定

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（2）从霉烂的花生壳、动物粪便中取样，稀释后将菌悬液加入到富集培养基中，适宜条件下富集培养三次。将富集培养的菌液用

平板划线法或稀释涂布平板

平板划线法或稀释涂布平板

法接种到初筛平板培养基上，适宜条件下培养后，挑选

单个菌落直径较大

单个菌落直径较大

的菌体进行纯化培养。
（3）经多轮筛选后获得H菌株。摇瓶培养H菌株一段时间后取5mL发酵液进行离心，取950μL离心上清液加入5μL一定浓度的AFB₁液，控制AFB，的终浓度1μg/mL。反应24h后经萃取、溶解、过滤后检测残余AFB₁的含量。该实验还需要在

灭菌的发酵离心上清液

灭菌的发酵离心上清液

中加入等量的AFB₁液作为空白对照。该步骤用于检测

H菌株分泌的黄曲霉毒素降解酶的活力

H菌株分泌的黄曲霉毒素降解酶的活力

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