研究发现，人溶菌酶（hLZ）是天然抗生素替代品。科研人员培育出转入hLZ基因羊以大规模生产人溶菌酶（从乳汁中提取），过程如图1所示，其中编号①～⑨表示过程；质粒S中的标记基因Leu控制合成亮氨酸，标记基因GFP控制合成绿色荧光蛋白；四种限制酶的识别序列及切割位点分别是BamHI：G↓GATCC、BglI：A↓GATCT、HindI：A↓AGCTT、XbaI：T↓CTAGA。请分析并回答下列问题：

（1）过程①采用PCR技术对hLZ基因进行扩增，若一个该DNA分子在PCR仪中经过4次循环，产物中共有

8

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个等长的hLZ基因片段。
（2）过程②物质B的获得是用限制酶

BamHⅠ、HindⅢ

BamHⅠ、HindⅢ

切割的结果，重组质粒T上hLZ基因前需添加

乳腺中特异性表达的基因的启动子

乳腺中特异性表达的基因的启动子

，以确保能够在转基因羊的乳汁中获得hLZ。
（3）为成功筛选出含重组质粒T的成纤维细胞，细胞培养液中

不需要

不需要

（填：“需要”或“不需要”）添加亮氨酸。过程⑧通常是用物理或化学方法激活受体细胞，使其完成

细胞的分裂和分化

细胞的分裂和分化

，再进行过程⑨获得转基因羊。
（4）基因编辑技术，能较为精确的对生物体基因组中特定目的基因进行改造。基因编辑体系包括核酸内切酶与一段小RNA（crRNA），crRNA通过碱基互补配对准确识别靶基因上特定序列后，引导核酸内切酶定位到靶基因上进行切割，随后细胞启动DNA损伤修复机制，可引发DNA小片段缺失或插入，进而实现基因编辑。科研人员利用上述方法使转基因羊干细胞中的R基因功能丧失（基因敲除），导致Tsp45I酶（一种限制酶）识别序列发生突变。提取进行基因编辑后的细胞（A1～A11）中的DNA，利用PCR技术扩增R基因的相关区域，再用Tsp45Ⅰ酶切处理后，电泳结果如图2所示（bp表示碱基对）。A5、A7、A11的电泳结果说明

R基因被完全敲除

R基因被完全敲除

，这些干细胞的R基因具体改变情况为

缺失21个碱基对

缺失21个碱基对

，一条染色体上的R基因未成功敲除细胞有

A6、A8、A9

A6、A8、A9

。