甘蔗线条花叶病毒（SCSMV）是引发甘蔗花叶病的主要病原之一，在世界各大甘蔗区普遍发生，严重威胁甘蔗产业的发展，如何建立快速有效的检测方法对于该病毒的防控有着极为重要的意义。研究人员通过病株汁液提纯得到病毒并以此制备抗体，由于不能完全排除寄主蛋白的影响，制备的抗体在检测时易出现假阳性；改进科研方案后，研究人员利用基因工程和细胞工程技术制备出甘蔗线条花叶病毒（SCSMV）的P1蛋白的单克隆抗体，相关流程如图1所示，图2为pET28a质粒及P1基因结构示意图。请回答下列问题。
（1）甘蔗线条花叶病毒是一种RNA病毒，可采取RT-PCR法获得大量P1基因，该过程中需要用到的酶有 逆转录酶（将RNA逆转录为DNA）和TaqDNA聚合酶逆转录酶（将RNA逆转录为DNA）和TaqDNA聚合酶。
（2）图1中，过程①需根据 P1两端（3′端）核苷酸（或碱基）序列P1两端（3′端）核苷酸（或碱基）序列设计特异性引物，还需在引物的5′端添加限制酶 Nco I和Sac INco I和Sac I的识别序列，确保P1基因正确插入启动子与终止子之间，其目的是 保证P1基因能够正确表达保证P1基因能够正确表达。已知P1基因右端X处的碱基序列为5′-GAATAAAATACTAAAATCTTC-3′，则其中一个引物序列为5′-GAAGATTTTAGTATTTTATTCGAAGATTTTAGTATTTTATTC-3′（从5′端到3′端）。
（3）pET28a-P1CS载体可导入经 Ca2+Ca2+ 处理的大肠杆菌以提高转化效率。该载体上存在调节基因，在大肠杆菌中可指导合成阻遏蛋白，阻遏蛋白与操纵基因结合，阻止 RNA聚合酶RNA聚合酶与启动子结合，抑制P1基因的转录，其原理如图3所示。分析图3可知，需将转化后的大肠杆菌接种在含 卡那霉素卡那霉素 的培养液中进行培养，并从培养液中分离提纯P1蛋白。
（4）图1中的过程⑤目的是 使机体产生特异性的B淋巴细胞使机体产生特异性的B淋巴细胞，随后可利用 聚乙二醇或灭活的病毒等聚乙二醇或灭活的病毒等诱导B细胞与骨髓瘤细胞融合，再进行筛选。获得杂交瘤细胞后，在注入家兔腹腔前还应进行 专一抗体检验阳性和克隆化培养专一抗体检验阳性和克隆化培养。
【考点】基因工程的操作过程综合；单克隆抗体及其应用．
【答案】逆转录酶（将RNA逆转录为DNA）和TaqDNA聚合酶；P1两端（3′端）核苷酸（或碱基）序列；Nco I和Sac I；保证P1基因能够正确表达；GAAGATTTTAGTATTTTATTC；Ca2+；RNA聚合酶；卡那霉素；使机体产生特异性的B淋巴细胞；聚乙二醇或灭活的病毒等；专一抗体检验阳性和克隆化培养
【解答】
【点评】
声明：本试题解析著作权属菁优网所有，未经书面同意，不得复制发布。
发布：2024/7/17 8:0:9组卷：17引用：5难度：0.5
相似题
-
1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．下列有关基因工程的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7 -
3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
