IKK激酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿IKKB基内编码区第1183位硫碱基T突变为C，导致IKK激酶上第395位酪氨酸被组氨酸代替。为研究该患儿发病机制，研究人员利用纯合野生鼠，应用大引物PCR定点诱变技术培育出SCID模型小鼠（纯合），主要过程如图1、2所示。分析回答下列问题：

（1）在 PCR反应体系中，除需加入引物、IKKB基因、缓冲液、Mg²⁺等外，还需加入

Taq酶（耐高温DNA聚合酶/热稳定DNA聚合酶）、4种脱氧核苷酸（或dNTP）

Taq酶（耐高温DNA聚合酶/热稳定DNA聚合酶）、4种脱氧核苷酸（或dNTP）

等成分。
（2）在图1获取突变基因过程中，需要以下3种引物：

引物A	5′-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3′（下划线字母为突变碱基）
引物B	5′-TAAGCTTCGAACATCCTA-3′（下划线部分分为限制酶HindⅢ识别序列）
引物C	5′-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3′（下划线部分分为限制酶SacⅠ识别序列）

则 PCR₁中使用的引物有

引物A和引物C

引物A和引物C

，PCR₂中使用的引物有

引物B

引物B

和图中大引物的

②

②

（填“①”或“②”）链。
（3）PCR一般要经历三十多次循环，每个循环包括变性、复性、延伸三个环节，在第一个循环之前通常
在95℃左右条件下处理数分钟，称为预变性，预变性的目的是

增加大分子模板DNA彻底变性的概率

增加大分子模板DNA彻底变性的概率

。
（4）研究人员经鉴定、筛选获得一只转基因杂合鼠F₀，并确认突变基因已经稳定同源替代IKKB基因。利用杂合鼠F₀，通过杂交获得SCID模型鼠，请将实验思路补充完整：

选F₀与野生鼠杂交，得F₁；让F₁雌雄鼠随机交配得F₂

选F₀与野生鼠杂交，得F₁；让F₁雌雄鼠随机交配得F₂

；提取F₂中每只小鼠的基因组DNA，通过基因测序选出SCID模型鼠。