图1为生产转基因抗虫棉时使用的质粒，图2为生产转基因抗虫棉时所用目的基因侧翼涉及的限制酶的酶切位点。
（1）为了高效地构建基因表达载体，最好选用 HindⅢ和BamHⅠHindⅢ和BamHⅠ（填限制酶名称）同时酶切质粒和目的基因。
（2）为了筛选出基因表达载体，需要将DNA连接酶处理后的溶液与大肠杆菌混合在一起进行培养。为了促使大肠杆菌吸收外源DNA，需要用 CaCl2 或（Ca2+）CaCl2 或（Ca2+）处理大肠杆菌使其处于感受态。随后再将大肠杆菌涂布在含 氨苯青霉素氨苯青霉素的培养基中培养，一般情况下这样培养出来的大肠杆菌有两种类型：一种是结合了目的基因的质粒，一种是未结合目的基因的质粒。可以加入 HindⅢ和BamHⅠHindⅢ和BamHⅠ分别去切割两种质粒，其中结合了目的基因的质粒在酶切后能产生目的基因。
（3）图示质粒在设计时插入了T-DNA序列，并且将启动子、多克隆位点和终止子序列插入到T-DNA中（注：插入不会破坏T-DNA的作用），T-DNA的作用是 将 T‐DNA 之间的DNA序列转移并整合至受体细胞的染色体DNA上将 T‐DNA 之间的DNA序列转移并整合至受体细胞的染色体DNA上。
（4）有人担心基因工程中使用的抗性基因可转移至近缘生物中，本例中的质粒能否有助于降低氨苄青霉素抗性基因转移到近缘生物的风险？为什么？
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】HindⅢ和BamHⅠ；CaCl2 或（Ca2+）；氨苯青霉素；HindⅢ和BamHⅠ；将 T‐DNA 之间的DNA序列转移并整合至受体细胞的染色体DNA上
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：15引用：3难度：0.7
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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