脑心肌炎病毒（EMCV，RNA病毒）是引起人、猪脑炎和心肌炎的病原体。为研制疫苗，科研人员按如图流程培育转基因酵母菌，来生产EMCV的衣壳蛋白VP1。其中，受体酵母菌是组氨酸合成缺陷型，HIS4基因表达的酶催化组氨酸的合成，C418是一种抗生素。请回答下列问题：
（1）过程①通过RT-PCR获得目的基因，需要的工具酶有 逆转录酶逆转录酶、热稳定性DNA聚合酶热稳定性DNA聚合酶。
（2）下列3种引物中，过程①应选择的是 acac。
a.5'-GGAATTCGCCACCATCCGAGTCGAAAACGCTGAA-3'
b.5'-TCGTCGACCATCGATAGCCACTCGCCTAACGCC-3'
c.5'-ATTTGCGCCGCTCACTCTAGCATCAAGACT-3'
（3）过程③将质粒2导入大肠杆菌的目的是 让其在大肠杆菌中复制让其在大肠杆菌中复制，该过程需要用 Ca2+Ca2+处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞。
（4）过程⑤将质粒2线性化时使用的是 salⅠsalⅠ （限制酶），过程⑥线性DNA需整合到酵母细胞的染色体DNA中目的基因才能 稳定遗传并表达稳定遗传并表达。
（5）线性DNA整合到酵母细胞染色体DNA时，可能是单拷贝整合，也可能是多拷贝整合。过程⑦先将酵母菌培养在缺乏 组氨酸组氨酸的培养基中，筛选获得导入目的基因的酵母菌；后将筛选出的酵母菌接种于含2mg•L-1G418的培养基中进行培养，选择生长良好的酵母菌再转接到含4mg•L-1G418的培养基中继续培养，其目的是 筛选出目的基因多拷贝整合的酵母菌筛选出目的基因多拷贝整合的酵母菌。
（6）研究人员用兔抗EMCV血清与酵母细胞生产的VP1蛋白进行抗原-抗体免疫反应试验，其目的是 检测酵母细胞生产的VP1与EMCV的VP1的抗原性（结构）是否一致检测酵母细胞生产的VP1与EMCV的VP1的抗原性（结构）是否一致。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录酶；热稳定性DNA聚合酶；ac；让其在大肠杆菌中复制；Ca2+；salⅠ；稳定遗传并表达；组氨酸；筛选出目的基因多拷贝整合的酵母菌；检测酵母细胞生产的VP1与EMCV的VP1的抗原性（结构）是否一致
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：12引用：1难度：0.7
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2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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