乳酸菌无氧呼吸过程中,第一阶段产生的丙酮酸会在LDH的催化下产生乳酸,科学家通过改造乳酸脱氢酶(LDH),能够高效地生产高纯度的苯乳酸。
(1)科学家拟改造LDH基因成为mLDH基因,需将LDH第52位的酪氨酸替换为亮氨酸,使得活性中心增大,可用于生产苯乳酸。
①先将LDH基因片段连入载体中,形成环状质粒,如图1。

将突变后的序列设计在引物1中,以环状质粒为PCR的 模板模板,再向体系中加入四种脱氧核苷酸(dNTP)、TaqTaq酶、引物2引物2以及碱基替换后的引物进行扩增LDH基因,PCR产物的序列便引入了预期的突变。下列引物序列中符合引物1要求的有 AA、DD。
A.5'-TGACTGACTAACACTCGGAC-3'
B.5'-TGACTGACAACCACTCGGAC-3'
C.5'-TGACTGACGATCACTCGGAC-3'
D.5'-TGACTGACGAGCACTCGGAC-3'
②上述PCR产物为 链链状DNA分子,改造后的LDH基因序列位于PCR产物的两侧,需要用 DNA连接DNA连接酶将产物两端连接,获得含有mLDH基因的质粒。
(2)产生苯乳酸的过程还需FDH酶参与,现需要构建同时含有mLDH、FDH的基因表达载体。根据图2信息,先用限制酶 NdeⅠNdeⅠ和 XhoⅠXhoⅠ切割 质粒2质粒2(质粒1/质粒2)和空载体,将两种酶切产物连接获得连接产物,再酶切另一质粒和上一步中的连接产物,连接获得基因表达载体。
(3)上述科学实践属于生物工程中的 蛋白质蛋白质工程。
【考点】基因工程的操作过程综合.
【答案】模板;Taq;引物2;A;D;链;DNA连接;NdeⅠ;XhoⅠ;质粒2;蛋白质
【解答】
【点评】
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发布:2024/6/27 10:35:59组卷:29引用:1难度:0.7
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