乳酸菌无氧呼吸过程中，第一阶段产生的丙酮酸会在LDH的催化下产生乳酸，科学家通过改造乳酸脱氢酶（LDH），能够高效地生产高纯度的苯乳酸。
（1）科学家拟改造LDH基因成为mLDH基因，需将LDH第52位的酪氨酸替换为亮氨酸，使得活性中心增大，可用于生产苯乳酸。
①先将LDH基因片段连入载体中，形成环状质粒，如图1。
将突变后的序列设计在引物1中，以环状质粒为PCR的 模板模板，再向体系中加入四种脱氧核苷酸（dNTP）、TaqTaq酶、引物2引物2以及碱基替换后的引物进行扩增LDH基因，PCR产物的序列便引入了预期的突变。下列引物序列中符合引物1要求的有 AA、DD。
A．5'-TGACTGACTAACACTCGGAC-3'
B．5'-TGACTGACAACCACTCGGAC-3'
C．5'-TGACTGACGATCACTCGGAC-3'
D．5'-TGACTGACGAGCACTCGGAC-3'
②上述PCR产物为 链链状DNA分子，改造后的LDH基因序列位于PCR产物的两侧，需要用 DNA连接DNA连接酶将产物两端连接，获得含有mLDH基因的质粒。
（2）产生苯乳酸的过程还需FDH酶参与，现需要构建同时含有mLDH、FDH的基因表达载体。根据图2信息，先用限制酶 NdeⅠNdeⅠ和 XhoⅠXhoⅠ切割 质粒2质粒2（质粒1/质粒2）和空载体，将两种酶切产物连接获得连接产物，再酶切另一质粒和上一步中的连接产物，连接获得基因表达载体。
（3）上述科学实践属于生物工程中的 蛋白质蛋白质工程。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】模板；Taq；引物2；A；D；链；DNA连接；NdeⅠ；XhoⅠ；质粒2；蛋白质
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：29引用：1难度：0.7
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