PCR定点突变技术是最常用的基因突变技术，通过定点诱变可以在体外改造DNA分子。重叠延伸PCR是发展最早的PCR定点突变技术，操作过程如图1。可通过测序检验定点突变是否成功。现欲将改造后的基因构建重组质粒导入大肠杆菌，质粒结构如图2。回答下列问题：
（1）图1所示重叠延伸PCR中，第1对引物是 突变引物FP2和通用引物RP2突变引物FP2和通用引物RP2；在第1对引物组成的反应系统和第2对引物组成的反应系统中各进行一次复制，共产生 33种DNA分子；此过程不能将两对引物共置于同一反应系统中，原因是 突变引物FP2和突变引物RP1可以互补配对，导致引物失效突变引物FP2和突变引物RP1可以互补配对，导致引物失效。
（2）图1所示DNA分子不能延伸，原因是 DNA单链延伸的方向必须是5’到3’DNA单链延伸的方向必须是5’到3’。
（3）分析图1和图2，要将突变的基因定向插入质粒并构建表达载体，应如何设计通用引物FP1和通用引物RP2？应保证突变基因右侧应是CTAG应保证突变基因右侧应是CTAG。
（4）为筛选出含有目的基因的大肠杆菌，通常采用影印法（使用无菌的绒毡布压在培养基A的菌落上，带出少许菌种，平移并压在培养基B上，结果如图3）。培养基A中应添加 氨苄青霉素氨苄青霉素，培养基B中应添加 四环素四环素，含有重组质粒的菌落是 4、64、6（填写数字），原因是 用两种限制酶对质粒进行切割时，会破坏四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的农杆菌能在含有氨苄青霉素的培养基上能生存，但不能在含有四环素培养基上生存用两种限制酶对质粒进行切割时，会破坏四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的农杆菌能在含有氨苄青霉素的培养基上能生存，但不能在含有四环素培养基上生存。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定；基因工程的操作过程综合．
【答案】突变引物FP2和通用引物RP2；3；突变引物FP2和突变引物RP1可以互补配对，导致引物失效；DNA单链延伸的方向必须是5’到3’；应保证突变基因右侧应是CTAG；氨苄青霉素；四环素；4、6；用两种限制酶对质粒进行切割时，会破坏四环素抗性基因，但不会破坏氨苄青霉素抗性基因，因此导入重组质粒的农杆菌能在含有氨苄青霉素的培养基上能生存，但不能在含有四环素培养基上生存
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：45引用：2难度：0.5
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1．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
2．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
