玉米（2n=20）是我国栽培面积最大的作物。为使其获得抗除草剂性状，获得抗除草剂转基因玉米自交系A，技术路线如图。
（1）为防止酶切产物自身环化，构建表达载体需用2种限制酶，选择的原则是 AA（单选）。
①Ti质粒内，每种限制酶只有一个切割位点
②G基因编码蛋白质的序列中，每种限制酶只有一个切割位点
③酶切后，G基因形成的两个黏性末端序列不相同
④酶切后，Ti质粒形成的两个黏性末端序列相同
A．①③B．①④C．②③D．②④
（2）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有 复制原点和酶切位点复制原点和酶切位点（答出两点即可）。
而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有 启动子和终止子启动子和终止子（答出两点即可）。
（3）如表是4种玉米自交幼胚组织培养不同阶段的结果。据表可知，细胞脱分化时使用的激素是 2，4-D2，4-D，自交系 乙乙的幼胚最适合培养成愈伤组织作为转化受体。
| 激素 结果 自交系 |
2，4-D（2.0mg/L） | 6-BA（0.5mg/L） | IBA（2.0mg/L） |
| 愈伤组织形成率（%） | 芽的分化率（%） | 根的诱导率（%） | |
| 甲 | 99 | 13 | 90 |
| 乙 | 85 | 80 | 87 |
| 丙 | 88 | 83 | 12 |
| 丁 | 16 | 85 | 83 |
提高受体细胞的转化率
提高受体细胞的转化率
。农杆菌的T-DNA携带插入其内的片段转移到受体细胞的 染色体DNA
染色体DNA
上。筛选转化的愈伤组织，需使用含 除草剂
除草剂
的选择培养基。（5）转化过程中，愈伤组织表面常残留农杆菌，导致未转化愈伤组织隔壁可能在选择培养基上生长。含有内含子的报告基因只能在真核生物中正确表达，其产物能催化无色物质K呈现蓝色。用K分别处理以下愈伤组织，出现蓝色的是
BD
BD
（多选）。A．无农杆菌附着的未转化愈伤组织
B．无农杆菌附着的转化愈伤组织
C．农杆菌附着的未转化愈伤组织
D．农杆菌附着的转化愈伤组织
（6）组织培养获得的转基因植株（核DNA中仅插入一个G基因）进行自交，在子代含G基因的植株中，纯合子占
1
3
1
3
（7）如表是鉴定含G基因植株的4种方法。请预测同一后代群体中，4种方法检出的含G基因植株的比例，从小到大依次是
X4，X3，X2，X1
X4，X3，X2，X1
。| 方法 | 检测对象 | 检测目标 | 检出的含G基因植株的比例 |
| PCR扩增 | 基因组DNA | G基因 | X1 |
| 分子杂交 | 总mRNA | G基因转录产物 | X2 |
| 抗原-抗体杂交 | 总蛋白质 | G基因编码的蛋白质 | X3 |
| 喷洒除草剂 | 幼苗 | 抗除草剂幼苗 | X4 |
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】A；复制原点和酶切位点；启动子和终止子；2，4-D；乙；提高受体细胞的转化率；染色体DNA；除草剂；BD；；X4，X3，X2，X1
1
3
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：20引用：1难度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
