甜玉米与普通玉米相比，甜玉米中可溶性糖向淀粉的转化较慢导致可溶性糖含量高，汁多质脆，富含多种维生素。为了使甜玉米更富有生产应用价值，科研人员通过转基因技术培育出了超量表达P蛋白转基因甜玉米。在超量表达P基因载体的构建中，所用DNA片段和Ti质粒的酶切位点如图1所示。回答下列问题：
（1）强启动子是一段有特殊结构的DNA片段，能被识别并结合，驱动基因的持续转录。为使P基因在玉米植株中超量表达，应优先选用 BamHⅠ和SacⅠBamHⅠ和SacⅠ酶组合，将DNA片段和Ti质粒切开后构建重组表达载体。
（2）外植体经脱分化形成的玉米放入农杆菌液浸泡后进行植物组织培养，培养基中需加入 潮霉素潮霉素进行筛选，最终获得多个玉米株系a1、a2、a3、a4。通过对a1、a2、a3、a4四株甜玉米株系的蛋白质表达量进行测定结果如图2，导致a4株系的表达量低于野生型的原因是 a4株系玉米中可能未导入重组质粒或导入目的基因未表达a4株系玉米中可能未导入重组质粒或导入目的基因未表达。
（3）真核基因的编码区含有内含子和外显子，图3为淀粉酶合成基因片段，其转录后形成的前体RNA需通过剪接（切去内含子对应序列）和加工后方能用于翻译。为了进一步提高甜玉米中淀粉的含量，科研人员提出通过降低淀粉酶合成有关基因的表达实现生产目标。研究人员研究发现吗啉反义寡核苷酸是一种RNA剪接抑制剂，将其注入植物细胞内会使基因表达受阻，科研人员将吗啉反义寡核苷酸导入玉米的受精卵中起到明显效果。针对它的具体作用，科研人员提出以下假说：
假说1：导致RNA前体上内含子1的对应序列不能被剪。
假说2：导致RNA前体上内含子1和外显子2的对应序列同时被剪切。
①为了验证上述假说，分别从受精卵发育后3天的实验组和对照组胚细胞中提取，逆转录形成cDNA。若假说1成立，使用如图所示引物2和引物4进行PCR后电泳的结果为 ADAD（填字母）。
A．实验组有目的条带
B．实验组无目的条带
C．对照组有目的条带
D．对照组无目的条带
②若要证明假说2成立，需要选择如图 3和43和4所示引物进行PCR。
③某次实验结果电泳发现：实验组和对照组都没有任何条带，从PCR操作过程角度解释可能的原因是 退火温度太高、引物自连或互连退火温度太高、引物自连或互连（至少写出两点）。
【考点】基因工程的操作过程综合；植物的组织培养．
【答案】BamHⅠ和SacⅠ；潮霉素；a4株系玉米中可能未导入重组质粒或导入目的基因未表达；AD；3和4；退火温度太高、引物自连或互连
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：13引用：1难度：0.6
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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发布：2024/12/31 5:0:5组卷：3引用：2难度：0.7
