乙酰胆碱酯酶（AChE）是催化乙酰胆碱分解的水解酶，还能与有机磷农药发生特异反应，在水质检测中可用于有机磷农药污染的快速检测，乙酰胆碱酯酶对防治人类疾病、保护生态环境等方面的研究具有非常重要的意义。回答下列问题：
（1）AChE的提取与纯化：AChE广泛存在于各种动物组织中，欲从动物肝脏中提取AChE，获取新鲜肝脏后，必须立即处理或低温保存，因为 乙酰胆碱酯酶很有可能失去活性乙酰胆碱酯酶很有可能失去活性。将猪肝切碎后，加低温蒸馏水，为了防止血液过快的凝结，可适量加入 血液抗凝剂血液抗凝剂，在组织捣碎机中捣碎后离心，取 上清液上清液用于进一步分离和纯化。
（2）AChE的基因克隆技术：利用PCR技术或RT-PCR技术（即利用逆转录和PCR技术）克隆AChE基因时，反应体系中均需要加入 耐高温的TaqDNA聚合耐高温的TaqDNA聚合酶，加入dNTP用于提供 原料和能量原料和能量。PCR产物经 凝胶电泳凝胶电泳技术纯化后，可用 限制性内切核酸酶和DNA连接限制性内切核酸酶和DNA连接酶处理回收的DNA和克隆载体，获得重组DNA分子，最终达到体内克隆AChE基因的目的。
（3）AChE的基因表达：若构建大肠杆菌表达系统，最好选择 RT-PCRRT-PCR技术（填“PCR”或“RT-PCR”）获取AChE基因．与克隆AChE基因相比，表达载体中还需要加入大肠杆菌的 启动子和终止子启动子和终止子等。在培养大肠杆菌时，常使用 LB液体LB液体培养基进行扩大培养，用 稀释涂布平板稀释涂布平板法接种到平板上，更易获得相应菌株。
（4）研究人员在进行某地水质检测时，发现水样能与AChE发生特异反应，若不及时治理，可能会造成水体 富营养化富营养化。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定；基因工程的操作过程综合．
【答案】乙酰胆碱酯酶很有可能失去活性；血液抗凝剂；上清液；耐高温的TaqDNA聚合；原料和能量；凝胶电泳；限制性内切核酸酶和DNA连接；RT-PCR；启动子和终止子；LB液体；稀释涂布平板；富营养化
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：8引用：2难度：0.5
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1．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
2．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：3引用：3难度：0.7
