IKK激酶参与动物体内免疫细胞的分化。临床上发现某重症联合免疫缺陷（SCID）患儿KK基因编码区第1183位碱基T突变为C，导致IKK上第395位酪氨酸被组氨酸代替。为研究该患儿发病机制，研究人员利用纯合野生鼠应用大引物PCR定点诱变技术培育出SCID模型小鼠（纯合），主要过程如图1、2。分析回答：

（1）在PCR反应体系中，需加入引物、IKKB基因、缓冲液、Mg²⁺等外，还需加入

Taq酶/耐高温DNA聚合酶/热稳定DNA聚合酶、4种脱氧核苷酸（dNTP）

Taq酶/耐高温DNA聚合酶/热稳定DNA聚合酶、4种脱氧核苷酸（dNTP）

等。
（2）在图1获取突变基因过程中，需要以下3种引物：

引物A	5′-CCCCAACCGGAAAGTGTCA-3′（下划线字母为突变碱基）
引物B	5′-TAAGCTTCGAACATCCTA--3′（下划线部分为限制酶HindⅢ识别序列）
引物C	5′-GTGAGCTCGCTGCCCCAA-3′（下划线部分为限制酶SacⅠ识别序列）

则PCR1中使用的引物有

引物A和引物B

引物A和引物B

，PCR2中使用的引物有

引物C

引物C

和图中大引物的

②

②

（①②）链。
（3）PCR的反应程序为：94℃3min；94℃30s,58℃30s,72℃50s,30个循环。在循环之前的94℃3min处理为预变性；循环中72℃处理的目的是

Taq酶从引物起始进行互补链合成

Taq酶从引物起始进行互补链合成

。
（4）据图2分析代孕母鼠对移入子宫的胚胎基本不发生免疫反应，这为

胚胎在受体内存活

胚胎在受体内存活

提供了可能。
（5）研究人员经鉴定、筛选获得一只转基因杂合鼠F₀，并确认突变基因已经稳定同源替代IKK基因，请你设计完成获得SCID模型鼠的实验步骤：
①杂交亲本：

F₀×野生鼠

F₀×野生鼠

，杂交得F₁；
②F₁雌雄鼠随机交配得F₂；
③提取F₂每只小鼠的基因组DNA，采用分子生物学方法，利用TKK基因探针和突变基因探针进行筛选，则

IKK基因探针检测未出现杂交带，突变基因探针检测出现杂交带

IKK基因探针检测未出现杂交带，突变基因探针检测出现杂交带

为模型鼠。