图示pIJ702是一种常用质粒，其中tsr为硫链丝菌素（一种抗生素）抗性基因；mel为黑色素合成基因，其表达能使白色的链霉菌菌落变成黑色菌落；而限制酶SacⅠ、SphⅠ，BglⅠ在pIJ702上分别只有一处识别序列。回答下列问题。
| 表1 | ||
| pIJ702 | pZHZ8 | |
| BglⅡ | 5.7kb | 6.7kb |
| 表2 | |||||
| 固体培养基中硫链丝菌素浓度（μg/mL） | 0 | 1 | 2 | 5 | 10 |
| 不含质粒的链霉菌生长状况 | +++++ | +++ | + | - | - |
| “+”表示生长；“-”表示不生长。 | |||||
磷酸二酯键
磷酸二酯键
的断裂，切割形成的末端有黏性末端和平末端
黏性末端和平末端
两种。（2）以SacⅠ和SphⅠ切取的目的基因置换质粒PIJ702上长度为0.4kb的SacⅠ/sphⅠ片段，构建重组质粒pZHZ8．上述两种质粒的限制酶酶切片段长度见表1．由此判断目的基因的片段长度为
1.4
1.4
kb,判定目的基因中含有一个BglⅡ切割位点的理由是pIJ702上的原有BglⅡ位点被目的基因置换得到的环状pZHZ8，仍能被BglⅡ切割成一条线段
pIJ702上的原有BglⅡ位点被目的基因置换得到的环状pZHZ8，仍能被BglⅡ切割成一条线段
。（3）导入目的基因时，首先用
Ca2+
Ca2+
处理链霉菌使其成为感受态细胞，再将重组质粒pZHZ8溶于缓冲液
缓冲液
中与感受态细胞混合，在一定的温度下可以促进链霉菌完成转化
转化
过程。（4）不含质粒的链霉菌在含硫链丝菌素的固体培养基上生长状况如表2所示。若要筛选导入pZHZ8的链霉菌细胞，所需硫链丝菌素浓度至少应在
5
5
μg/mL以上，挑选成功导入pZHZ8的链霉菌的具体方法是根据导入pIJ702的链霉菌菌落呈黑色、导入pZHZ8的链霉菌盖落呈白色的特点，通过观察菌落的颜色进行挑选
根据导入pIJ702的链霉菌菌落呈黑色、导入pZHZ8的链霉菌盖落呈白色的特点，通过观察菌落的颜色进行挑选
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】磷酸二酯键；黏性末端和平末端；1.4；pIJ702上的原有BglⅡ位点被目的基因置换得到的环状pZHZ8，仍能被BglⅡ切割成一条线段；Ca2+；缓冲液；转化；5；根据导入pIJ702的链霉菌菌落呈黑色、导入pZHZ8的链霉菌盖落呈白色的特点，通过观察菌落的颜色进行挑选
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：21引用：2难度：0.6
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