肿瘤坏死因子（TNF）在体内、体外均能杀死某些肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞的增殖作用。科研人员利用乳腺生物反应器大量生产肿瘤坏死因子。已知限制酶BamHⅠ、HindⅢ、PstⅠ、BglⅡ的识别序列及切点分别是G↓GATCC、A↓AGCTT、CTGC↓AG、A↓GATCT。回答下列问题：
（1）在构建基因表达载体时，能否选用PstI切割质粒和含肿瘤坏死因子基因的DNA片段，其原因是 不能，因为用PstⅠ切割质粒会破坏四环素抗性基因不能，因为用PstⅠ切割质粒会破坏四环素抗性基因；若用HindⅢ和BglⅡ切割含肿瘤坏死因子基因的DNA片段，除选用HindⅢ和BglⅡ组合外还可以选用 HindⅢ、BamHⅠHindⅢ、BamHⅠ组合切割质粒。
（2）利用PCR技术扩增TNF基因时，扩增过程可以在 PCR仪PCR仪中自动完成。已知DNA复制时，只能从子链的5′端向3′端开始延伸，据此可知应选择图3甲、乙、丙、丁四种引物中的 乙、丙乙、丙作为引物，若扩增4次，共需要引物 3030个。
（3）科学家需将TNF基因与 乳腺细胞中特异表达的基因的启动子等调控元件乳腺细胞中特异表达的基因的启动子等调控元件重组在一起，通过 显微注射显微注射等方法，导入哺乳动物的 受精卵受精卵中，由其发育成的转基因动物进入泌乳期后，可以在其分泌的乳汁中获取所需要的TNF。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】不能，因为用PstⅠ切割质粒会破坏四环素抗性基因；HindⅢ、BamHⅠ；PCR仪；乙、丙；30；乳腺细胞中特异表达的基因的启动子等调控元件；显微注射；受精卵
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：14引用：4难度：0.7
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
