为研究30Kc6蛋白对家蚕细胞凋亡的抑制作用,请根据以下提供材料与用具,以家蚕细胞的细胞数目变化和DNA碎片化为测定指标,完善实验思路,预测实验结果并进行分析与讨论。
材料与用具:家蚕细胞悬液、一定浓度的 H2O2溶液、30Kc6蛋白溶液、培养液、培养瓶、血细胞计数板、显微镜、DNA碎片化测定试剂盒等。
(要求与说明:细胞计数的具体操作过程和DNA碎片化测定试剂盒的具体操作不做要求,不考虑加入溶液对体积的影响,实验条件适宜)
回答下列问题:
(一)实验思路:
①取家蚕细胞悬液加入到含培养液的培养瓶中,用血细胞计数板在显微镜下计数,用DNA碎片化测定试剂盒检测DNA碎片化情况,并记录。
②将各瓶细胞悬液随机均分为A、B、C、D4组,A、B组用适量且等量的一定浓度的H2O2溶液处理,C、D组不作处理。
③每隔一段时间,分别去上述4组培养瓶内的培养物,用血细胞计数板在显微镜下计数,用DNA碎片化测定试剂盒检测DNA碎片化情况,并记录每隔一段时间,分别去上述4组培养瓶内的培养物,用血细胞计数板在显微镜下计数,用DNA碎片化测定试剂盒检测DNA碎片化情况,并记录。
④当细胞数量和DNA碎片化程度达到一定值时,向B、C组分别加入等量且适量的30Kc6蛋白溶液当细胞数量和DNA碎片化程度达到一定值时,向B、C组分别加入等量且适量的30Kc6蛋白溶液。
⑤重复步骤 3,统计并分析所得的数据。
(二)预测实验结果(以坐标曲线图形式表示DNA碎片化程度变化情况,并标出加入药物的时间点):

。
(三)分析讨论
①细胞凋亡过程除了DNA碎片化外,同时还伴随着线粒体的破裂现象,这些现象都是基因选择性表达选择性表达的结果。
②实验用H2O2需要控制特定浓度的原因是H2O2引起细胞凋亡的作用效应与浓度有关H2O2引起细胞凋亡的作用效应与浓度有关,若想建立细胞凋亡模型除了要考虑H2O2浓度外,还需要考虑H2O2作用时间H2O2作用时间。为获得这两个因素的最佳组合需要设计怎样的实验方案?设置不同浓度以及每个浓度的不同作用时间处理,观察各组细胞的细胞凋亡率设置不同浓度以及每个浓度的不同作用时间处理,观察各组细胞的细胞凋亡率。(简要方案说明)


【考点】细胞死亡.
【答案】每隔一段时间,分别去上述4组培养瓶内的培养物,用血细胞计数板在显微镜下计数,用DNA碎片化测定试剂盒检测DNA碎片化情况,并记录;当细胞数量和DNA碎片化程度达到一定值时,向B、C组分别加入等量且适量的30Kc6蛋白溶液;
;选择性表达;H2O2引起细胞凋亡的作用效应与浓度有关;H2O2作用时间;设置不同浓度以及每个浓度的不同作用时间处理,观察各组细胞的细胞凋亡率

【解答】
【点评】
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发布:2024/6/27 10:35:59组卷:24引用:1难度:0.6
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