新冠病毒（+RNA）的刺突蛋白S通过与人体黏膜细胞表面的ACE2受体结合而进入细胞，是宿主抗体的重要作用位点。下图1是科研人员利用新冠病毒的+RNA提取S蛋白基因和S蛋白受体结合域RBD基因作为抗原基因序列，研制新冠病毒双抗原疫苗的技术路线。已知PCR1与PCR2要分别进行，然后将产物混合，使用引物1和引物4进行PCR3，最终获得大量S-RBD融合基因（1300bp）。
（1）PCR3过程中，片段1与片段2连接形成S-RBD融合基因，需要使用 耐高温DNA聚合耐高温DNA聚合酶，该酶的作用是 将单个的脱氧核苷酸连接到引物的3'端将单个的脱氧核苷酸连接到引物的3'端。
（2）为使S-RBD融合基因在工程菌中表达时，先合成S蛋白，在重组pX质粒中，引物4对应的区段要连接在靠近 启动子启动子（填“启动子“或“终止子”）的部位，原因是 原核细胞中基因表达时可以边转录边翻译，引物4对应的区段靠近启动子时先转录出S蛋白的mRNA序列原核细胞中基因表达时可以边转录边翻译，引物4对应的区段靠近启动子时先转录出S蛋白的mRNA序列。
（3）为初步检测过程B构建是否成功，对重组pX系列质粒及其酶切产物进行凝胶电泳检测，结果如图2。据图可知，酶切时用到的酶是 HindⅢ、Ndel、EcoRIHindⅢ、Ndel、EcoRI，重组质粒pX2和pX5构建成功的依据是 重组质粒pX2和pX5酶切后形成的750和550片段碱基对总和为S—RBD融合基因长度1300重组质粒pX2和pX5酶切后形成的750和550片段碱基对总和为S—RBD融合基因长度1300。
（4）在工程菌的筛选时，可先后用两种抗生素进行影印培养实验（将首次培养的菌落用灭菌绒布沾取印到新培养基上培养），在第二次培养时存活的菌落是否含有目的基因 否否（填“是”或“否”）。鉴定pX质粒是否导入工程菌还可以采用的方法是 观察菌落是否具有荧光，有荧光的则含有pX质粒观察菌落是否具有荧光，有荧光的则含有pX质粒。
（5）试从免疫学角度分析此种双抗原疫苗比常规S蛋白疫苗更具优势的原因 此种双抗原疫苗含有S蛋白受体结合域RBD，有利于进入靶细胞，从而激发细胞免疫此种双抗原疫苗含有S蛋白受体结合域RBD，有利于进入靶细胞，从而激发细胞免疫。
【答案】耐高温DNA聚合；将单个的脱氧核苷酸连接到引物的3'端；启动子；原核细胞中基因表达时可以边转录边翻译，引物4对应的区段靠近启动子时先转录出S蛋白的mRNA序列；HindⅢ、Ndel、EcoRI；重组质粒pX2和pX5酶切后形成的750和550片段碱基对总和为S—RBD融合基因长度1300；否；观察菌落是否具有荧光，有荧光的则含有pX质粒；此种双抗原疫苗含有S蛋白受体结合域RBD，有利于进入靶细胞，从而激发细胞免疫
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：19引用：2难度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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