Cre/loxP重组酶系统是对转基因受体细胞DNA上的特定序列进行定点切割和重新连接，从而在基因或染色体水平上对生物基因进行遗传改造的一种技术。请回答下列问题：
（1）loxP具有方向性，结构如图1所示，其中决定方向的序列是②②（填序号）。
（2）Cre酶能催化如图2所示的反应，随机识别DNA分子上同向排列的两个相同的loxP序列并在图1的②中特定位点切断DNA双链，切口被重新连接后，保留片段22，从而实现目标基因的敲除。若经Cre酶作用使得2个loxP位点间的序列发生反转，其原因可能是两个loxP序列方向相反两个loxP序列方向相反。
（3）Cre/loxP重组酶系统可以调控基因的表达，在目的基因上游上游（填“上游”或“下游”）插入一个带有loxP位点的编码终止密码子的序列，在Cre酶存在的情况下，目的基因表达表达（填“表达”或“不表达”）。
（4）在转基因烟草的制备过程中，通常用农杆菌转化农杆菌转化法把携带抗虫基因的重组质粒导入烟草细胞，经检测导入成功后，标记基因如抗除草剂基因即失去用途，可用Cre/loxP重组酶系统将标记基因敲除，其继续留在烟草体内可能会引发的生物环境安全问题是抗除草剂基因可能转移到杂草中，造成基因污染抗除草剂基因可能转移到杂草中，造成基因污染。
（5）GUS基因编码的酶可将无色底物生成蓝色产物，GFP基因会产生绿色荧光蛋白，这两种基因都可作为标记基因，配合Cre/loxP重组酶系统来研究发育生物学的问题。
①构建基因表达载体时，可用限制酶和DNA连接限制酶和DNA连接酶将loxP序列、GUS基因及GFP基因连接，接上35S启动子之后可在组织中检测出蓝色区而无绿色荧光区（如图3所示），这是由于GFPGFP基因自身无启动子而无法表达。
②Cre基因经38℃热处理后可被激活表达，在此前提下组织中可检测出绿色荧光区，据此分析绿色荧光区形成的原因是Cre重组酶能（特异性识别并）切割loxP序列，使GFP基因得以表达Cre重组酶能（特异性识别并）切割loxP序列，使GFP基因得以表达，采用延长热处理时间延长热处理时间等手段可以扩大组织中绿色荧光区的面积。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】②；2；两个loxP序列方向相反；上游；表达；农杆菌转化；抗除草剂基因可能转移到杂草中，造成基因污染；限制酶和DNA连接；GFP；Cre重组酶能（特异性识别并）切割loxP序列，使GFP基因得以表达；延长热处理时间
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：64引用：5难度：0.5
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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