下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

限制酶	BamHⅠ	HindⅢ	EcoRⅠ	SmaⅠ
识别序列及 切割位点

（1）一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有

0

0

、

2

2

个游离的磷酸基团。
（2）要用图1中的质粒和图2中外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是

SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因

SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因和外源DNA中的目的基因

。
（3）与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止

质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，目的基因和质粒反向连接

质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，目的基因和质粒反向连接

。
（4）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入

DNA连接

DNA连接

酶。
（5）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了

便于重组DNA分子的筛选

便于重组DNA分子的筛选

。