（一）草莓是春节市场上非常受欢迎的一种水果，但却存在易腐烂，难保存的问题。某科研团队为了确定腐烂草莓上的菌种类型和探究草莓的新产业开发模式，进行了以下一系列的研究。请回答：
（1）科研团队用棉签刮取腐烂的草莓表面，然后用

无菌水

无菌水

冲洗棉签获得菌悬液，然后利用

稀释涂布平板法/涂布分离

稀释涂布平板法/涂布分离

法将其接种至LB固体培养基中，培养基中出现了均匀分布的单菌落。
（2）腐烂的草莓非常软烂，原因是微生物产生的

果胶酶

果胶酶

作用后使草莓组织更加松散。为了获得使草莓变软的微生物，用接种环分别刮取LB培养基上菌落的菌种，接种到

以果胶为唯一碳源的

以果胶为唯一碳源的

培养基上，发现了以下两种情况：
①LB培养基中的菌落数量和种类更多，原因是

草莓腐烂处的微生物并非都能产生果胶酶

草莓腐烂处的微生物并非都能产生果胶酶

。
②后者培养基上的菌落与在LB培养基上培养时相比，生长状况不尽相同，可能原因是

菌种对营养物质的需求不同，导致生长状况不同

菌种对营养物质的需求不同，导致生长状况不同

。
（3）科研团队为了制成草莓果酒，将草莓放入榨汁机制成黏稠的果酱，然后接种酿酒酵母进行发酵，结果发现酒精含量低，且极易造成污染。可以将果酱进行

稀释和杀菌/灭菌

稀释和杀菌/灭菌

处理后再用于发酵。
（二）某种植物的根会产生一种次生代谢产物，该次生代谢产物具有很高的药用价值。在研究这种次生代谢产物合成的分子机制时发现，基因A表达沉默时才能产生，且有物质甲存在时会使基因A表达。物质甲在环境中非常常见，为了实现基因A的沉默，现设计将基因A反向连接到植物基因组中。基因A与Ti质粒结构如下图所示，箭头表示转录方向。

（4）为了使基因A反向连接到Ti质粒上，选用EcoRI和BamHI酶进行切割并分离获得A基因，然后加入

DNA连接酶

DNA连接酶

形成重组Ti质粒。为了保证重组Ti质粒在农杆菌中的稳定存在，需将工程发根农杆菌进行

除去EcoRⅠ和BamHⅠ酶/限制酶/EcoRⅠ和BamHⅠ酶基因/限制酶基因

除去EcoRⅠ和BamHⅠ酶/限制酶/EcoRⅠ和BamHⅠ酶基因/限制酶基因

处理。
（5）将含有重组T质粒的发根农杆菌与经过创伤处理的外植体共同培养一段时间，然后进行

除菌（不能填灭菌）

除菌（不能填灭菌）

后，在培养基中加入

潮霉素

潮霉素

以筛选出成功导入基因A片段的植物细胞。再转移至含有

适当配比的营养物质和植物生长调节剂

适当配比的营养物质和植物生长调节剂

的培养基上培养得到愈伤组织。结果发现未更换培养基的情况下，就长出了较多的根，可能原因是发根农杆菌的T-DNA中含有

生长素合成酶/生长素合成相关

生长素合成酶/生长素合成相关

基因。
（6）为了检验转基因是否成功，应在

含

含

（填“含”或“不含”）物质甲的培养液中将获得的根进行水培，发现只有部分能产生目标次生代谢产物。部分根无法产生次生代谢产物的可能原因是

反接的基因A未成功表达

反接的基因A未成功表达

。