由于乳酸菌难以在高密度下培养，研究人员将乳酸菌的乳酸脱氢酶基因（LDH）导入酵母菌，通过酵母菌发酵生产乳酸。回答下列问题：
（1）PCR获取LDH时所用的引物是 引物①和引物④引物①和引物④，该过程中引物的作用是 定位目的基因的位置，与模板链结合，作为DNA聚合酶的作用起点定位目的基因的位置，与模板链结合，作为DNA聚合酶的作用起点。
（2）将LDH基因插入质粒前，用EcoRⅠ和ApaⅠ酶切质粒和LDH，双酶切的优点是 防止目的基因（LDH）和质粒自身环化，有利于目的基因（LDH）在质粒上正向连接防止目的基因（LDH）和质粒自身环化，有利于目的基因（LDH）在质粒上正向连接，将LDH连接在质粒上时所用的酶是 T4DNA连接酶T4DNA连接酶。
（3）首先将LDH表达载体导入大肠杆菌并进行筛选，筛选时培养基中应加入 氨苄青霉素氨苄青霉素。再将含有的基因表达载体的大肠杆菌与酵母菌置于电转杯中，通过电激将目的基因表达载体导入酵母菌。质粒在酵母菌中不会随着酵母菌繁殖而丢失的原因是 质粒上含有真核生物复制原点，能在酵母菌中复制质粒上含有真核生物复制原点，能在酵母菌中复制。
（4）如图2是酵母菌发酵过程中乳酸含量的变化。在培养时间超过100h后，乳酸浓度不再上升的主要原因是 乳酸浓度过高导致PH下降，抑制酵母菌生长乳酸浓度过高导致PH下降，抑制酵母菌生长。为提高乳酸的生产效率，连续发酵时添加新培养基最长周期为 6060h。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】引物①和引物④；定位目的基因的位置，与模板链结合，作为DNA聚合酶的作用起点；防止目的基因（LDH）和质粒自身环化，有利于目的基因（LDH）在质粒上正向连接；T4DNA连接酶；氨苄青霉素；质粒上含有真核生物复制原点，能在酵母菌中复制；乳酸浓度过高导致PH下降，抑制酵母菌生长；60
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：32引用：1难度：0.6
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（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
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