四尾栅藻具有环境适应能力强和生长速度快等优点，如果能将其进行品种改良，提高含油量，有望解决微藻生物柴油产业化进程的瓶颈。研究人员利用基因工程技术将油料作物紫苏DGAT1基因导入四尾栅藻，获得转基因的产油微藻，利用地热废水培养，不仅能生产生物柴油，还能治理地热废水。操作过程如图，请回答下列问题：
注：LacZ基因编码产生的酶可以分解物质X-gal,从而使菌落显现出蓝色。若无该基因或该基因被破坏，则菌落呈白色。
（1）将质粒pMD19-DGAT1导入大肠杆菌前，通常先用Ca2+处理大肠杆菌，使细胞处于一种 能吸收周围环境中DNA分子能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。
（2）为了便于筛选含pMD19-DGAT1重组质粒的大肠杆菌，该选择培养基中应添加 卡那霉素和X-gal卡那霉素和X-gal物质。在培养基中挑取 白色白色颜色的大肠杆菌菌落可提取该 质粒并获取目的基因。
（3）由如图推测，用 EcoRⅠEcoRⅠ和 SmaⅠSmaⅠ酶切割pMD19-DGAT1获得DGATI基因，并与酶切后的载体pBI121连接再次构建基因表达载体，用这两种酶切割的目的是 保证其准确插入质粒（定向连接）并防止其出现自身环化等问题（或防止反向连接和自身环化）保证其准确插入质粒（定向连接）并防止其出现自身环化等问题（或防止反向连接和自身环化）。
（4）启动子往往具有物种特异性，在载体pBI121质粒中插入紫苏DGAT1基因，其上游启动子应选择 BB（填字母）。
A．紫苏DGAT1基因启动子 B．四尾栅藻启动子 C．大肠杆菌启动子
（5）为了判断DGAT1基因是否导入四尾栅藻细胞，可利用 聚合酶链式反应聚合酶链式反应（中文全称）等技术进行检测。
（6）为检测转基因四尾栅藻对地热废水的去污能力，研究人员设计实验并得到相应实验结果如表。
| 指标 | 总氮（mg/L） | 总磷（mg/L） | 氟化物（mg/L） |
| 废水培养基 | 23.2 | 4.32 | 4.56 |
| 培养转基因四尾栅藻11天后 | 1.9 | 0.45 | 0.84 |
应添加对照组：废水培养非转基因四尾栅藻 11 天后，检测总氮、总磷和氟化物的含量
应添加对照组：废水培养非转基因四尾栅藻 11 天后，检测总氮、总磷和氟化物的含量
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】能吸收周围环境中DNA分子；卡那霉素和X-gal；白色；EcoRⅠ；SmaⅠ；保证其准确插入质粒（定向连接）并防止其出现自身环化等问题（或防止反向连接和自身环化）；B；聚合酶链式反应；应添加对照组：废水培养非转基因四尾栅藻 11 天后，检测总氮、总磷和氟化物的含量
【解答】
【点评】
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发布：2024/12/18 13:30:2组卷：32引用：3难度：0.5
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
