PHB2蛋白具有抑制细胞增殖的作用。为初步探究某动物PHB2蛋白抑制人宫颈癌细胞增殖的原因，研究者从基因数据库中获取了该蛋白的基因编码序列（简称phb2基因），大小为0.9kb（1kb=1000碱基对），利用大肠杆菌表达该蛋白。回答下列问题。
（1）为获取phb2基因，提取该动物肝脏组织的总RNA，再经 逆转录逆转录过程得到cDNA，将其作为PCR反应的模板，并设计一对特异性引物来扩增目的基因。
（2）图1为所用载体图谱示意图，图中限制酶的识别序列及切割位点见下表。为使phb2基因（该基因序列不含图1中限制酶的识别序列）与载体正确连接，在扩增的phb2基因两端分别引入 EcoRⅠEcoRⅠ和 PvuⅡPvuⅡ两种不同限制酶的识别序列。经过这两种酶酶切的phb2基因和载体进行连接时，可选用 T4DNA连接酶T4DNA连接酶（填“E.coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）。
相关限制酶的识别序列及切割位点（注：箭头表示切割位点）
| 名称 | 识别序列及切割位点 | 名称 | 识别序列及切割位点 |
| HindⅢ | A↓AGCTT TTCGA↑A |
EcoRⅠ | G↓AATTC CTTAA↑G |
| PvitⅡ | CAG↓CTG GTC↑GAC |
PstⅠ | CTGC↓AG GA↑CGTC |
| KpnⅠ | G↓GATCC CCATG↑G |
BamHⅠ | G↓GTACC CCTAG↑G |
DNA半保留复制
DNA半保留复制
，此技术设计引物很关键，引物的作用是 使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸
使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸
。利用此技术扩增目的基因可以在PCR扩增仪中自动完成，完成以后，常采用 琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳
来鉴定PCR的产物。（4）基因工程的核心步骤是
基因表达载体的构建
基因表达载体的构建
，其中启动子的作用是 它是RNA聚合酶识别和结合的部位
它是RNA聚合酶识别和结合的部位
。【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】逆转录；EcoRⅠ；PvuⅡ；T4DNA连接酶；DNA半保留复制；使DNA聚合酶能够从引物的3'端开始连接脱氧核苷酸；琼脂糖凝胶电泳；基因表达载体的构建；它是RNA聚合酶识别和结合的部位
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：7引用：1难度：0.7
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1．下列有关基因工程技术和蛋白质工程技术叙述正确的是（ ）
发布：2025/1/5 8:0:1组卷：6引用：1难度：0.7 -
2．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6 -
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