α-抗胰蛋白酶是一种主要由肝细胞合成的血浆蛋白，具有维持内环境稳定的功能。科研人员利用乳腺生物反应器获得了α-抗胰蛋白酶。回答下列问题：
（1）将人正常干细胞系L-02培养在某动物细胞培养基中，在37℃、5%CO2的培养箱中培养。CO2的主要作用是 维持培养液的pH值维持培养液的pH值。待细胞培养至对数生长末期，用 胰蛋白胰蛋白酶消化，进行细胞计数和离心收集，提取RNA，经 逆转录逆转录（填过程）最终获得α-抗胰蛋白酶基因。
（2）利用PCR技术扩增α-抗胰蛋白酶基因时，科研人员在两个引物的 5'端5'端（填“5'端”或“3'端”）各添加一种限制酶的酶切位点，在该端添加的理由是 DNA复制方向是由5'端到3'端DNA复制方向是由5'端到3'端。α-抗胰蛋白酶基因两端添加不同的限制酶切割位点的目的是 防止自身连接环化防止自身连接环化。
（3）将α-抗胰蛋白酶基因与牛乳腺中 乳蛋白乳蛋白的启动子等调控组件重组在一起，构建成基因表达载体。若将α-抗胰蛋白酶基因直接导入牛受精卵中，往往不能获得所需的转基因牛，理由是 直接将其导入受体细胞，很可能会被降解或不能表达直接将其导入受体细胞，很可能会被降解或不能表达。
（4）将含基因表达载体的受精卵置于早期胚胎培养液中进行培养，早期胚胎进行移植前，需进行性别鉴定。性别鉴定的操作思路是 取囊胚滋养层细胞做DNA分析性别鉴定取囊胚滋养层细胞做DNA分析性别鉴定。
（5）转基因牛成年后需对其α-抗胰蛋白酶基因的表达产物进行检测，一般采用 抗原—抗体杂交抗原—抗体杂交法。
【答案】维持培养液的pH值；胰蛋白；逆转录；5'端；DNA复制方向是由5'端到3'端；防止自身连接环化；乳蛋白；直接将其导入受体细胞，很可能会被降解或不能表达；取囊胚滋养层细胞做DNA分析性别鉴定；抗原—抗体杂交
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：1引用：2难度：0.6
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1．动物细胞培养和植物组织培养是细胞工程的基本技术，下列关于这两项技术的叙述，正确的是（ ）
发布：2024/12/31 1:30:1组卷：29引用：2难度：0.7 -
2．回答与基因工程、动物克隆和胚胎工程有关的问题：
（1）几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。在进行基因工程操作时，可以从植物体中提取几丁质酶的mRNA，以mRNA为材料可以获得cDNA，其原理是。若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。
（2）为了提高动物成纤维细胞克隆形成率，可以选择适宜的培养基、添加牛血清、以支持生长等措施。当第一个卡氏瓶中的细胞浓度不再增加时，若要细胞继续增殖，可采用的方法是。细胞培养过程中，培养箱中通常要维持一定的CO2浓度，CO2的作用是。
（3）下列关于胚胎工程的叙述，错误的是
A．在动物的饲料中添加一定量的促性腺激素促使超数排卵
B．若在囊胚期进行胚胎分割，内细胞团均等分割，滋养成则不必
C．可以从雌性动物体内卵泡处吸取卵泡液，取出卵母细胞进一步培养成熟
D．胚胎成纤维细胞可以用于胚胎干细胞的培养，因为其能分泌抑制细胞分化的物质。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：4引用：1难度：0.7 -
3．据国际糖尿病联盟最新数据，2021年全球约5.37亿成人患有糖尿病，670万成人因糖尿病或其并发症死亡。如图是研究人员提出的治疗方案，请回答下列问题：
（1）从患者体内获得体细胞后，对其进行的初次培养称为，培养的细胞在贴壁生长至铺满培养皿底时停止分裂，这种现象称为。一般来说，动物细胞培养需要的条件有（少答出两点）。
（2）利用PCR技术扩增正常胰岛素基因的前提条件是。目前临床用的胰岛素生效较慢，科学家将胰岛素β链的第28和29个氨基酸调换顺序，成功获得了速效胰岛素。生产速效胰岛素，需要对进行定向改造。
A.胰岛素
B.胰岛素mRNA
C.胰岛素基因
D.胰岛
（3）欲检测胰岛类似细胞是否具有胰岛B细胞的正常生理功能，可设计如下实验：将等量的胰岛类似细胞与正常胰岛B细胞分别加入两组相等浓度的培养液中，适宜且相同条件下进行培养，一段时间后分别检测两组培养液中。
（4）该治疗糖尿病的方法与异体移植相比，突出的优点是。发布：2024/12/31 2:30:2组卷：35引用：2难度：0.6
