美西螈具有很强的再生能力。研究表明，美西螈的巨噬细胞在断肢再生的早期起重要作用。为研究巨噬细胞的作用机制，科研人员制备了抗巨噬细胞表面标志蛋白CD14的单克隆抗体，具体方法如下。回答下列问题：
（一）基因工程抗原的制备
（1）根据美西螈CD14基因的核苷酸序列，合成引物，利用PCR扩增CD14片段。已知DNA聚合酶催化引物的3'-OH与加入的脱氧核苷酸的5'-P形成磷酸二酯键，则新合成链的延伸方向是 5'→3'5'→3'（填“5'→3'”或“3'→5'”）。
（2）载体和CD14片段的酶切位点及相应的酶切 抗性基因序列如图1所示。用XhoI和SalⅠ分别酶切CD14图1和载体后连接，CD14接入载体时会形成正向连接和反向连接的两种重组DNA。可进一步用这两种限制酶对CD14的连接方向进行鉴定，理由是 正向连接的重组DNA有这两种酶切位点（限制酶的识别序列）；而反向连接的重组DNA会形成新的序列，没有这两种酶的酶切位点（没有限制酶的识别序列）正向连接的重组DNA有这两种酶切位点（限制酶的识别序列）；而反向连接的重组DNA会形成新的序列，没有这两种酶的酶切位点（没有限制酶的识别序列）。
（3）培养能表达CD14蛋白的大肠杆菌，分离纯化目的蛋白。
（二）抗CD14单克隆抗体的制备流程如图2所示：
（1）步骤①和步骤⑤分别向小鼠注射 CD14蛋白/CD14抗原CD14蛋白/CD14抗原和 分泌抗CD14抗体的杂交瘤细胞分泌抗CD14抗体的杂交瘤细胞。
（2）步骤②所用的SP2/0细胞的生长特点是 能在体外无限增殖能在体外无限增殖。
（3）吸取③中的上清液到④的培养孔中，根据抗原—抗体杂交原理，需加入 CD14蛋白CD14蛋白进行专一抗体检测，检测过程发现有些杂交瘤细胞不能分泌抗CD14抗体，原因是 参与形成杂交瘤细胞的B淋巴细胞种类多，有的不能分泌抗CD14抗体参与形成杂交瘤细胞的B淋巴细胞种类多，有的不能分泌抗CD14抗体。
（4）步骤⑥从 小鼠腹水小鼠腹水中提取到大量的抗CD14抗体，用于检测巨噬细胞。
【考点】基因工程的操作过程综合；单克隆抗体及其应用．
【答案】5'→3'；正向连接的重组DNA有这两种酶切位点（限制酶的识别序列）；而反向连接的重组DNA会形成新的序列，没有这两种酶的酶切位点（没有限制酶的识别序列）；CD14蛋白/CD14抗原；分泌抗CD14抗体的杂交瘤细胞；能在体外无限增殖；CD14蛋白；参与形成杂交瘤细胞的B淋巴细胞种类多，有的不能分泌抗CD14抗体；小鼠腹水
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：177引用：2难度：0.6
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（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
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