为开发适合猪生长的发酵秸秆饲料，某科研小组以猪盲肠为微生物来源，从中分离能有效分解纤维素的细菌。回答下列问题。
（1）分离纯化纤维素分解菌时，首先需要用

无菌水

无菌水

对猪盲肠食糜进行梯度稀释，进行梯度稀释的原因是

猪盲肠食糜中微生物的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落

猪盲肠食糜中微生物的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落

。
（2）将猪盲肠食糜稀释液接种到纤维素鉴别培养基上培养一段时间后，将刚果红溶液倒入培养基中侵染10分钟后，用

氯化钠

氯化钠

溶液洗去表面浮色。有分解纤维素能力的菌落周围会出现透明圈。测量并记录透明圈、菌落直径，结果如表1所示。分析实验结果，应选择的最优目标菌株为

2

2

号。需要进一步测定所得菌株纤维素酶活性，其活性可用一定条件下

单位时间内纤维素的消耗量（减少量）或葡萄糖的生成量

单位时间内纤维素的消耗量（减少量）或葡萄糖的生成量

表示。
表一 不同菌株的透明圈直径和菌落直径

菌株编号	透明圈直径	菌落直径
1	2.81	1.62
2	3.23	0.71
3	3.03	1.09

（3）利用上述所得菌株制备纤维素酶的流程如图2.透析的目的是

除去小分子杂质

除去小分子杂质

；粗提物中包含纤维素酶及其他杂蛋白。请写出一种纯化得到纤维素酶的方法及其纯化原理

凝胶色谱法：根据蛋白质之间的分子大小、吸附性质等差异进行纯化；或电泳法：根据蛋白质之间的电荷、分子大小等差异进行纯化

凝胶色谱法：根据蛋白质之间的分子大小、吸附性质等差异进行纯化；或电泳法：根据蛋白质之间的电荷、分子大小等差异进行纯化

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