RT-PCR是从mRNA获得cDNA并进行扩增的一种技术。通常要先提取总RNA，然后以其中的mRNA为模板，利用寡脱氧胸苷酸在酶的作用下合成cDNA，再以cDNA为模板进行常规的PCR扩增。
（1）RT-PCR过程中所需要的酶是 逆转录酶和（耐热的）DNA聚合酶逆转录酶和（耐热的）DNA聚合酶。扩增得到的目的基因能够表达的一个关键步骤就是有效的转录，所以需要将目的基因插入质粒的 启动子和终止子之间启动子和终止子之间。
（2）寡脱氧胸苷酸是由数量少于20的脱氧胸苷酸连接而成的核苷酸链，它可以特异性的结合到mRNA的poly（A）尾端。据此推测，mRNA的poly（A）尾端位于 3'端3'端（填“3′端”或“5′端”）。
（3）RT-PCR可提高某些微量RNA病毒的检测灵敏度，原因是 增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量（或浓度），便于检测增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量（或浓度），便于检测。重组新冠疫苗（腺病毒载体）就是利用该技术获得新冠病毒的S蛋白基因作为目的基因，与剔除了复制相关基因的腺病毒作为载体，制成的腺病毒载体疫苗，该疫苗的优点是 目的基因可以表达S蛋白，进而引起人体发生免疫反应；剔除了复制相关的基因可以避免病毒在人体中复制（增殖）目的基因可以表达S蛋白，进而引起人体发生免疫反应；剔除了复制相关的基因可以避免病毒在人体中复制（增殖）。
（4）为使PCR技术扩增的口的基因能够与载体连接（如图所示，A、B、C、D为引物），则需要在引物 B和CB和C上添加相应的限制酶识别序列。该DNA分子在PCR仪中经过5次循环后会产生等长的目的基因片段 2222个。核糖体结合位点（RBS）是影响原核细胞翻译起始的因素之一，RBS序列位于DNA编码链的 5'端5'端（填“3′端”或“5′端”，编码链是模板链的互补链）。为了使目的基因在大肠杆菌中高效表达，对其编码序列进行了改造，分析其可能的原因是 UAA的终止效率更高，串联终止密码子能够提高翻译的有效终止UAA的终止效率更高，串联终止密码子能够提高翻译的有效终止（“UAA”、“UAG”均为终止密码子）。
【考点】DNA片段的扩增与电泳鉴定．
【答案】逆转录酶和（耐热的）DNA聚合酶；启动子和终止子之间；3'端；增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量（或浓度），便于检测；目的基因可以表达S蛋白，进而引起人体发生免疫反应；剔除了复制相关的基因可以避免病毒在人体中复制（增殖）；B和C；22；5'端；UAA的终止效率更高，串联终止密码子能够提高翻译的有效终止
【解答】
【点评】
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发布：2024/4/20 14:35:0组卷：11引用：2难度：0.4
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1．科学家为了提高光合作用过程中Rubiaco酶对CO2的亲和力，利用PCR定点突变技术改造Rubisco酶基因，从而显著提高了植物的光合作用速率。请回答下列问题：
（1）PCR定点突变技术属于（填“基因工程”或“蛋白质工程”）。可利用定点突变的DNA构建基因表达载体，常用将基因表达载体导入植物细胞，还需用到植物细胞工程中的技术，才能最终获得转基因植物。
（2）PCR过程所依据的原理是。利用PCR技术扩增，若将一个目的基因复制10次，则需要在缓冲液中至少加入个引物。
（3）目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和表达的过程称为。科研人员通过实验研究发现培育的该转基因植株的光合作用速率并未明显增大，可能的原因是。
（4）另有一些科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。有关叙述错误的是。
A．选择受精卵作为外源基因的受体细胞是因为这种细胞的全能性最容易表达
B．采用DNA分子杂交技术可检测外源基因在小鼠细胞内是否成功表达
C．人的生长激素基因能在小鼠细胞表达，说明遗传密码在不同种生物中可以通用
D．将转基因小鼠体细胞进行核移植（克隆），可以获得多个具有外源基因的后代发布：2025/1/16 8:0:1组卷：14引用：2难度：0.6 -
2．数字PCR技术是一种核酸分子绝对定量技术，其原理如图所示。下列有关叙述正确的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：7引用：2难度：0.6 -
3．下列关于DNA片段扩增及其鉴定的说法错误的是（ ）
发布：2024/12/30 23:30:2组卷：4引用：3难度：0.7
