某种病毒为单股正链RNA病毒。某科研团队经原核表达系统成功表达了该种病毒的包膜E蛋白，用于该种病毒的检测、单克隆抗体的制备以及基因工程疫苗的研发等。如图为所用载体的示意图，其中EcoRⅠ、NdeⅠ、HindⅢ和BamHⅠ四种限制酶切割形成的末端均不相同，且酶切效率均达不到100%。回答下列问题：
（1）扩增E蛋白基因采用的RT-PCR法包括反转录和PCR两步，该方法需要提取病毒的 RNARNA作为反转录的模板，在反转录和PCR过程中使用的酶分别为 反转录酶和Taq酶反转录酶和Taq酶。
（2）已知该种病毒的E蛋白基因在内部及两侧没有限制酶对应的序列，设计PCR引物时需要 在两种引物的5'端分别添加限制酶NdeⅠ和限制酶HindⅢ的识别序列在两种引物的5'端分别添加限制酶NdeⅠ和限制酶HindⅢ的识别序列，以保证目的基因与载体正确连接。
（3）酶切后的E蛋白基因和载体在 DNA连接酶DNA连接酶的作用下构成基因表达载体，导入经Ca2+处理过的大肠杆菌，然后将上述大肠杆菌培养在含 卡那霉素卡那霉素的培养基上，在该培养基上生长的大肠柑橘不都含有E蛋白基因，原因是 能在含卡那霉素的培养基上生长的大肠杆菌，一种导入的是普通质粒，一种导入的是含E基因的重组质粒能在含卡那霉素的培养基上生长的大肠杆菌，一种导入的是普通质粒，一种导入的是含E基因的重组质粒。
【考点】基因工程的操作过程综合．
【答案】RNA；反转录酶和Taq酶；在两种引物的5'端分别添加限制酶NdeⅠ和限制酶HindⅢ的识别序列；DNA连接酶；卡那霉素；能在含卡那霉素的培养基上生长的大肠杆菌，一种导入的是普通质粒，一种导入的是含E基因的重组质粒
【解答】
【点评】
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发布：2024/6/27 10:35:59组卷：2引用：1难度：0.5
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3．几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内，可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以从基因文库中获得。基因文库包括和。
（2）生物体细胞内的DNA复制开始时，解开DNA双链的酶是。在体外利用PCR技术扩增目的基因时，使反应体系中的模板DNA解链为单链的条件是。上述两个解链过程的共同点是破坏了DNA双链分子中的。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。当几丁质酶基因和质粒载体连接时，DNA连接酶催化形成的化学键是。
（4）提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是。
（5）若获得的转基因植株（几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中）抗真菌病的能力没有提高，根据中心法则分析，其可能的原因是。发布：2025/1/5 8:0:1组卷：2引用：2难度：0.6
